In vitro антикандидна ефективність екстрактів Syzygium aromaticum (гвоздики) проти вагінального кандидозу
Анотація
Передумови
Кандидозний вагініт - це глобальна небезпека для здоров’я, яка збільшує захворюваність серед жінок дітородного віку. Недавні дослідження показали високий рівень резистентності до наркотиків Кандида штами. Крім того, лікування вульвовагініту Candida під час вагітності є складним завданням, оскільки протигрибкова терапія пов’язана з патологіями плода. Отже, важливо розробити нові терапевтичні стратегії лікування вульвовагінального кандидозу.
Методи
У цьому дослідженні ми використовували метод дифузії диска для оцінки антикандидної активності різних Syzygium aromaticum екстракти (метанол, етилацетат, н-гексан та діетиловий ефір) проти C. albicans, C. glabrata, і C. tropicalis. Крім того, газова хроматографія-мас-спектрометрія (GC-MS) аналізують різні S. aromaticum екстракти проводили для визначення активних компонентів, що виявляють антикандидальну активність. Оцінювали цитотоксичність різних екстрактів гвоздики проти клітинної лінії HUH7.
Результати
Етилацетатний екстракт виявляв найвищу протигрибкову активність проти C. albicans, C. glabrata, і C. tropicalis з діаметром зони гальмування відповідно 20,9, 14,9 та 30,7 мм. Мінімальна інгібуюча концентрація S. aromaticum етилацетатний екстракт становив 250 мкг/диск проти C. tropicalis, і 500 мкг/диск проти C. albicans і C. glabrata, тоді як мінімальна фунгіцидна концентрація становила 0,5 мг/диск проти C. tropicalis і 1 мг/диск проти C. albicans і C. glabrata. GC-MS аналіз екстракту етилацетату виявив основну біоактивну сполуку як евгенол (58,88%), потім евгенілацетат (23,86%), транс-каріофілен (14,44%) та α-гумулен (1,88%). Аналіз цитотоксичності показав, що екстракт діетилового ефіру продемонстрував найнижчий токсикологічний ефект проти клітинної лінії HUH7, з відносною IC50 62,43 мкг/мл; метанольний екстракт продемонстрував більш високу токсичність (IC50, 24,17 мкг/мл).
Висновок
Як S. aromaticum екстракт виявляв високу протигрибкову активність при низьких концентраціях, він може бути потенційним джерелом природних протигрибкових препаратів.
Передумови
Методи
Приготування рослинних екстрактів
Процедуру екстракції проводили з використанням різних органічних розчинників (метанол, етилацетат, діетиловий ефір та н-гексан), демонструючи різні полярності, щоб забезпечити екстракцію всіх гідрофільних та ліпофільних біоактивних сполук. Квіткові бруньки S. aromaticum були отримані з місцевого ринку в Ер-Ріяді, Саудівська Аравія. Ми виявили рослинний матеріал, ідентифікацію підтвердив Саудівський гербарій, Департамент ботаніки, Науковий коледж, Університет короля Сауда. Рослинний матеріал був депонований у гербарії з номером ваучера (KSU-14682). Бруньки гвоздики дезінфікували, використовуючи 0,5% розчин гіпохлориту натрію (NaOCl), промивали три рази підряд стерильною дистильованою водою і давали висохнути. Висушений рослинний матеріал однорідно подрібнювали за допомогою механічного розчину. Порошкоподібний зразок (15 г) додавали до 200 мл різних органічних розчинників та інкубували на магнітній мішалці протягом 48 год. Далі суміш центрифугували при 9000 об/хв протягом 10 хв для видалення залишків. Надосадову рідину фільтрували за допомогою фільтрувального паперу ватмана для отримання прозорого фільтрату. Фільтрат концентрували за допомогою ротаційного випарника і зберігали при 4 ° C до використання. Вихід екстракту розраховували за такою формулою:
де R - маса залишку рослинного екстракту; S - маса сировини зразка рослини.
Ізоляти кандиди
Три Кандида видів, C. albicans, C. tropicalis, і C. glabrata були отримані з лікарні короля Халіда, Ер-Ріяд, Саудівська Аравія. Свіжий посівний матеріал готували шляхом субкультури кожного Кандида видів на середовище декстрозного агару Сабуро (SDA) при 35 ° C протягом 48 годин.
Приготування кандидозного посіву
Нахили SDA готували та інокулювали різними Кандида видів. Гриб збирали за допомогою 5 мл стерильного сольового розчину. Абсорбцію грибкової суспензії вимірювали при 560 нм за допомогою спектрофотометра, і кількість клітин регулювали, щоб досягти життєздатної кількості клітин 10 7 КУО/мл для кожного Кандида видів.
Антикандидальний біопроб
Визначення мінімальної інгібуючої концентрації (MIC)
MIC визначали як найнижчу концентрацію рослинного екстракту, що виявляє протигрибкову активність. MIC оцінювали лише для етилацетатного екстракту S. aromaticum як найефективніший екстракт гвоздики. Середовище SDA (15 мл) виливали в стерильну чашку Петрі у вигляді базального шару з подальшим додаванням 10 мл засіяного середовища (як описано вище) і давали застигнути. Стерильні фільтрувальні паперові диски (діаметром 8 мм), завантажені з різною концентрацією S. aromaticum етилацетатний екстракт (0,125, 0,25, 0,50, 1,0, 2,0 та 4,0 мг/диск) поміщали на засіяне середовище. Пластини інкубували при 5 ° C, щоб забезпечити дифузію екстракту. Потім пластини інкубували при температурі 35 ° С протягом 48 годин і діаметр зони інгібування вимірювали за допомогою штангенциркуля. Найнижча концентрація, яка виявляла протигрибкову активність проти Кандида виду було зареєстровано як MIC.