Комбінований ад’ювант поліметрію C покращує протипухлинний ефект онкології клітин CAR-T

Імунітет проти раку та імунотерапія

Редаговано
Рейн Рус

Медичний коледж Бейлора, США

Переглянуто
Робін Парихар

Медичний коледж Бейлора, США

Ян Сюй

Південний університет науки і техніки, Китай

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

поліметрію

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 Державна ключова лабораторія онкогенів та суміжних генів, Шанхайський інститут раку, лікарня Рендзі, Шанхайська медична школа Університету Цзяотун, Шанхай, Китай
  • 2 CARsgen Therapeutics, Шанхай, Китай

Вступ

Продемонстровано, що прийомна Т-клітинна імунотерапія є новим способом боротьби зі злоякісними пухлинами. Зокрема, Т-лімфоцити, розроблені для експресії химерних антигенних рецепторів (CAR), показали велику перспективу при лікуванні гематологічних злоякісних пухлин (1). Клітини CAR-T, орієнтовані на CD19, схвалені FDA для лікування рецидиву В-клітинного гострого лімфобластного лейкозу (B-ALL) та дифузної великої В-клітинної лімфоми (DLBCL) (2, 3).

Терапія CAR-T також є новим підходом до лікування інших злоякісних пухлин. В даний час Glypian-3 (GPC3), рецептор епідермального фактора росту (EGFR), рецептор епідермального фактора росту людини (HER2), карциноембріональний антиген (CEA), дизіалогангліозид 2 (GD2), мезотелін, специфічний для простати мембранний антиген (PSMA) та інтерлейкін-13Ra2 (IL13Ra2) були протестовані як мішені CAR-T клітин у твердій пухлині. Однак терапія CAR-T при солідних пухлинах не була настільки ефективною, як терапія, спрямована на гематологічні злоякісні пухлини (4–7).

Причини обмеженого успіху Т-Т-клітин у солідній пухлині активно досліджуються і, ймовірно, є багатофакторними. Однією з головних причин є імунодепресивне мікросередовище, яке може перешкоджати функції та стійкості Т-клітин CAR. Сюди входить наявність регуляторних Т-клітин, асоційованих з пухлиною макрофагів, супресорів клітин мієлоїду (MDSC) та асоційованих з раком фібробластів, які сприяють підвищенню рівня інгібуючих лігандів та цитокінів (8). Крім того, численні молекули імунних контрольних точок, такі як PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, B7S1 (9), сприяють виснаженню Т-клітин і гасять активацію Т-клітин у тканинах. Отже, блокада молекул імунних контрольних пунктів покращила протипухлинну активність клітин CAR-T (10). Крім того, індолеамін 2,3-діоксигеназа (IDO) - це внутрішньоклітинний фермент, який опосередковує метаболізм незамінної амінокислоти триптофану в імунодепресивні метаболіти. Активність IDO пухлини може інгібувати терапію CAR-T завдяки дії метаболітів триптофану, тоді як інгібітор IDO відновлює контроль пухлини на моделі лімфоми ксенотрансплантата (11). Ці дані свідчать про те, що орієнтація на імуносупресивне середовище пухлини є потенційним підходом для підвищення протипухлинного імунітету CAR-T клітин.

Поліінозинова-поліцитидилова кислота (полі I: C), синтетичний аналог дволанцюжкової РНК (dsRNA), розпізнається за допомогою таксоподібного рецептора 3 (TLR3), активованої dsRNA протеїнкінази (PKR), індукованого ретиноевою кислотою гена I білок (RIG-I) та асоційований з диференціацією меланоми білок 5 (MDA5) (12). Застосування полі I: C в імунотерапії пухлин було добре досліджене протягом декількох десятиліть. Полі I: C активує вроджену імунну систему з подальшим регулюванням адаптивного імунітету (13), що призводить до змін у мікросередовищі пухлини та вражаючого пригнічення росту пухлини (14, 15). Крім того, повідомляється, що полі I: C може продовжувати виживання CD4 + Т-клітин (16), сприяти активованій проліферації Т-клітин (17) та реактивувати інфільтруючі пухлину CD8 + Т-клітини (18). Більше того, дослідження показали, що полі I: C може безпосередньо викликати ракові клітини для ініціювання апоптозу, так що полі I: C може зменшити метастази пухлини у імунодефіцитних мишей (19). Це створило обґрунтування поєднання полі I: C з терапією клітин CAR-T.

У цьому дослідженні ми досліджуємо потенціал використання полі I: C для підвищення протипухлинної активності клітин CAR-T та основного механізму.

Матеріали і методи

Клітинні лінії та середні

Мишача карцинома товстої кишки лінії CT26 (EGFRvIII NEG) підтримувалась у нашій лабораторії. Ембріональна клітинна ниркова клітина 293T була придбана у Американської колекції типових культур (ATCC; Manassas, VA). Обидві клітини вирощували як моношар у культуральному середовищі DMEM (Gibco), що містить 10% бичачої сироватки плоду (FBS, Biowest) та 1% L-глутаміну. Клітинна лінія раку молочної залози E0771 (EGFRvIII NEG, подарована доктором Сян Чжан з Медичного коледжу Бейлора) культивували в середовищі RPMI 1640 (Gibco), доповненій 10% FBS і 10 ммоль/л HEPES. Усі клітини регулярно підтримували при 37 ° C в 5% атмосферному інкубаторі CO2. Ці клітинні лінії регулярно тестували на мікоплазму і мали негативний результат.

Миша EGFRvIII Будівництво

Мишачий гомолог мутації EGFRvIII людини був створений за допомогою послідовностей кДНК, що охоплюють мишачий EGFR, згідно з повідомленням (20). Коротко, послідовності кДНК, клоновані у вектор pPWT для побудови рекомбінантного мишачого EGFRvIII, були такими: пари основ 60-147, GT та 951-3737. Ця процедура клонування створює сполучний пептид (LEEKKGNYVVTDH), ідентичний такому, як у людському EGFRvIII. Пошкоджені реплікацією лентивірусні вектори, що містять рекомбінантний мишачий EGFRvIII, генерувались за допомогою пакувальних клітинних ліній 293T і використовувались для трансфекції клітин CT26 та E0771. Трансфіковані клітини інкубували з ch806 Ab з подальшим використанням міченого FITC козячого IgG проти людини, потім позитивні клітини сортували проточним цитометром.

Аналіз розповсюдження

Клітини пухлини висівали на 10 4 клітини/лунку в 96-лункові планшети з різною концентрацією полі I: C (0,5 нг/мл, 5 нг/мл, 50 нг/мл, 500 нг/мл, 5 мкг/мл). Активовані Т-клітини висівали в 96-лункові планшети з концентрацією полі I: C 10 і 50 мкг/мл. Проліферацію клітин аналізували методом CCK8 через 24, 48 та 72 години відповідно.