Вплив пікринової кислоти (2,4,6-тринітрофенолу) та хімічної речовини, що стримує укуси (денатоній

Анотація

Денервація задньої кінцівки - методика, що застосовується для вивчення регенерації периферичного нерва. Автотомія або аутофагія є небажаною реакцією на денервацію в таких дослідженнях. Застосування комерційного лосьйону, що застосовується для запобігання клюванню нігтів у людей, зменшує автотомію у щурів після денервації, але не повністю запобігає цьому. У цьому дослідженні автори оцінювали застосування пікринової кислоти для запобігання автотомії у щурів в експериментах на периферичних нервах. Вони провели трансекцію сідничного нерва у 41 дорослої самки щурів Wistar, а потім застосували або лосьйон, що стримує укус ( = 26) або насичений розчин пікринової кислоти ( = 15) місцево для ураженої задньої кінцівки відразу після операції та щодня протягом 1 місяця. Показники автотомії були нижчими для щурів, які отримували пікринову кислоту, ніж для щурів, які отримували лосьйон, що стримує укуси, через 1 тиждень та 2 тижні після операції, але не відрізнялися між двома групами через 4 тижні після операції. Автори роблять висновок, що застосування пікринової кислоти може бути використано як альтернативна стратегія для запобігання автотомії при дослідженнях периферичних нервів.

Дослідження регенерації периферичного нерва часто використовували трансекцію сідничного нерва у щурів як модель для поступальних експериментів 1,2. Автотомія є небажаною реакцією в цих дослідженнях, яка вперше була описана в 1979 році як поведінка, що викликає самокалечення після повної денервації задньої кінцівки через спонтанний невропатичний біль, дизестезію та парестезію 3,4,5. Автотомія зазвичай вражає пальці ніг денервованої кінцівки і може негативно вплинути на результати оцінок сідничного нерва. Наприклад, сідничний функціональний індекс (SFI) оцінює задню кінцівку щура, досліджуючи його сліди 6. Ампутація пальця ноги може змінити слід тварини і результати SFI, що призведе до виключення з дослідження 7 .

Оскільки різні механізми лежать в основі автотомії центральних та периферичних уражень 26,27, ми мали на меті оцінити вплив пікринової кислоти на автотомію в моделі пошкодження периферичного нерва та порівняти їх із механізмами лосьйону для запобігання укусів.

Методи

Вивчати дизайн

Ми використовували 41 дорослу самку щурів Wistar (отриману в Інституті Разі, Карадж, Іран) вагою 200–250 г на момент операції. Щурів утримували групами по чотири клітини (RRP30C, Razi Rad Co., Тегеран, Іран) із вільним доступом до їжі (Pars Animal Feed Co., Тегеран, Іран) та питної води в кімнаті з контрольованою температурою з 12- h: 12-годинне світло: темний цикл. Ми провели трансекцію сідничного нерва у всіх щурів, а потім обробили їх або лосьйоном, що стримує укуси ( = 26) або пікринова кислота ( = 15) протягом 1 місяця. Спостерігачі, які були засліплені для груп лікування, реєстрували оцінки автотомії для кожного щура через 1 тиждень, 2 тижні та 4 тижні після операції. Всі експерименти проводились із схвалення комітету з етики Тегеранського університету медичних наук (Іран).

Хірургічна процедура

Кожну щура знеболювали сумішшю кетаміну (100 мг на кг маси тіла; кетаміну гідрохлорид, Rotexmedica, Німеччина) та ксилазину (5 мг на кг маси тіла; ксилазину 2%, Alfasan, Woerden, Holland). Праву задню кінцівку щура поголили та продезінфікували розчином повідон-йоду. Правий сідничний нерв був обережно оголений дисекцією сідничного м’яза в асептичному стані, а 2-сантиметровий сегмент сідничного нерва був перерізаний на рівні середини стегна. М'яз і фасцію закривали простими 4-0 вікриловими швами, а шкіру - безперервним нейлоновим швом 4-0. Цефазолін (30 мг, Cefazex, Exir Pharmaceutical Co., Тегеран, Іран) вводили підшкірно, а звичайний фізіологічний розчин (5 мл, 0,9% Darou Pakhsh, Тегеран, Іран) вводили внутрішньочеревно. Всі процедури проводив один і той же навчений хірург.

Лікування профілактики автотомії

Ми обробили 26 щурів комерційним лосьйоном, що відлякує укуси, з активним інгредієнтом бензоатом денатонію (Nail Bite, J. Pickles and Sons, Кнаресборо, Великобританія) і обробили 15 щурів насиченим водним розчином (1,3%) пікринової кислоти (2, 4,6-тринітрофенол, Sigma-Aldrich Co., Сент-Луїс, Міссурі). Ми наносили приблизно 0,5 мл кожного розчину по всій знежиреній нозі (від кінчиків пальців до стегна) маленькою щіткою відразу після операції та щодня протягом 1 місяця. Після висихання пікринова кислота залишає жовте покриття на шкірі, тоді як лосьйон, що стримує укуси, утворює безбарвний шар.

Щурів спостерігали індивідуально принаймні один раз на день з особливою увагою протягом першої доби. Ми шукали зміни на шкірі, хутрі, очах, слизових оболонках, диханні та поведінці 28. Ми відстежували масу тіла, слиновиділення, сльозотеча, сечовипускання, дефекацію, порушення координації ходи, тремор, тоніко-клонічні або стереотипні рухи, зміни реакції на поводження і режим сну 28. Ми шукали будь-які зміни кольору сечі (особливо чорної), оскільки близько 88% пікринової кислоти виводиться із сечею 29 .

Бали автотомії

Результати автотомії для кожного щура були розраховані через 1 тиждень, 2 тижні та 4 тижні після операції, як описано раніше 3,30,31,32 кваліфікованим техніком, який не знав про схему дослідження та методи лікування. Були зафіксовані ураження, виразки та пошкодження кожної задньої кінцівки. Один бал призначався за видалення одного або декількох нігтів, за кожну травму дистальної половини пальця ноги і за кожну травму проксимальної половини пальця ноги. Максимальний загальний бал для кожної задньої кінцівки становив 11 (рис. 1).

6-тринітрофенолу

Відтворено з дозволу посилання 35.

Статистичний аналіз

Для статистичного аналізу ми використовували програмне забезпечення SPSS (версія 19.0; IBM Corp., Armonk, NY). Ми порівняли середні показники автотомії між двома групами в кожну точку часу за допомогою U-критерію Манна-Уітні. Ми також провели тест ANOVA Фрідмана для аналізу часових тенденцій кожної групи. значення

Результати

Жодної зміни у фізіології та поведінці не було виявлено у жодного щура, і жоден щур не загинув під час експериментів. Щури в обох групах займалися автотомією (рис. 2). Середні показники автотомії були нижчими у щурів, які отримували пікринову кислоту, ніж у щурів, які отримували лосьйон, що стримує укуси, у всі три моменти часу: 0,267 проти 3,231 через 1 тиждень після операції, 0,538 проти 3,654 через 2 тижні після операції та 0,636 проти 3,346 через 4 тижні після операції (рис. 3). Ці відмінності були значущими через 1 тиждень (U = 84,00, = 0,001, r = −0,51) і 2 тижні (U = 72,50, = 0,002, r = −0,46) після операції, але не через 4 тижні після операції (U = 96,50, = 0,124, r = −0,27; 3). Аналіз часових тенденцій показав, що показники автотомії в кожній групі суттєво не змінювались протягом 4-тижневого періоду (пікринова кислота, χ 2 (2) = 4,00, = 0,135; лосьйон, що стримує укуси, χ 2 (2) = 2,80, = 0,247).

(a) У цього щура, обробленого пікриновою кислотою, оцінка автотомії 1 була видалена для видалення нігтів. () У цієї щури, обробленої лосьйоном, що відлякує укуси, було встановлено оцінку автотомії 7, один бал за видалення нігтів і шість балів за повну травму трьох пальців ніг.