Захисна дія та терапевтичний індекс індраліну у неповнолітніх мавп-резусів

Михайло Васильович Васин

1 Державний науковий центр Російської Федерації - Інститут біомедичних проблем Російської академії наук, Хорошовський шлях, 76а, Москва 123007, Росія

Леонід Федорович Семенов

2 Науковий інститут медичної приматології Російської академії медичних наук, 1 Веселе, Сочі 354376, Росія

Микола Суворов

3 Центр хімії лікарських засобів, вул. Зувовська, 7, Москва, 119815, Росія

Всеволод В. Антипов

1 Державний науковий центр Російська Федерація - Інститут біомедичних проблем Російської академії наук, Хорошовський шлях, 76а, Москва 123007, Росія

Ігор Б. Ушаков

Леонід Олександрович Ільїн

4 Бурназький федеральний медичний біофізичний центр, Федеральне біомедичне агентство, вул. Гамалея, 17а, Москва 123098, Росія

Борис Олександрович Лапін

2 Науковий інститут медичної приматології Російської академії медичних наук, 1 Веселе, Сочі 354376, Росія

Пов’язані дані

Анотація

ВСТУП

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Експерименти на тваринах

Експерименти проводились на неповнолітніх мавпах-самцях і самках-резусах (Macaca mulatta) у віці від 2 до 3 років з масою тіла 2,1–3,5 кг. Середня вага тварин із нижчими та верхніми квартилями становила 2,8 (2,2–3,0) кг у контрольній радіаційній групі та 2,7 (2,2–3,1) кг у дослідній групі мавп (тих, хто отримував радіопротектор). Всіх тварин годували стандартною кормовою дієтою та питною водою. Дієта складалася з фруктів (яблука) та овочів (моркви, червоного буряка, капусти, картоплі), а також білка з курячих яєць. Евтаназія в цьому дослідженні не застосовувалась.

Це дослідження було проведено з урахуванням вимог відповідно до нормативно-правових актів про порядок проведення експериментальних робіт на тваринах, включаючи національні (Наказ Міністерства охорони здоров'я РФ № 267 від 19 червня 2003 р.) Та міжнародні етичні рекомендації щодо медичних біомедичні дослідження за участю тварин (Декларація Всесвітньої медичної асоціації, Гельсінкі, 2000).

Опромінення

Мавпи піддавались двосторонньому гамма-опроміненню всього тіла в експериментальній установці 60 Co моделі GUBE-2000 (2000 Ci з зарядом 60 Co) (Росія) у смертельній дозі 6,8 Гр (доза опромінення спричиняє 100% смертність тварин через 30 днів після опромінення = LD100/30) і потужність дози 22,8 cGy хв –1. Тварин опромінювали без наркозу. Поглинена доза в організмі (Dab) розраховувалася наступним чином: Dab = Dex × 1,137 × 0,877, де Dex = експозиційна доза опромінення в повітрі, 0,877 = коефіцієнт переходу для розрахунку поглинутої дози в повітрі від дози опромінення в повітрі, та 1,137 = коефіцієнт переходу енергії гамма-променю 60 Co 1,25 МеВ для розрахунку поглиненої дози в організмі з поглиненої дози в повітрі.

Введення ліків

Індралін (CAS 156799–03–0, Фармзащита, Федеральне біомедичне агентство, Москва, Росія) вводили мавпам в область стегна внутрішньом’язово (ім) у дозах 40, 60, 80 або 120 мг кг –1 у вигляді 2,5% розчину За 5 хв до впливу радіації. Після опромінення тварини отримували протимікробні засоби за єдиним протоколом лікування: левоміцетин (Ferein, Москва, Росія) 200 мг кг –1, що вводився перорально один раз на день у дні 1–10; пеніцилін (Biosynthes, Пенза, Росія) 150 мг кг –1 та стрептоміцин (Biochimic, Саранськ, Росія) 50 мг кг –1 м.д. один раз на день у дні 10–20. Чотири непроменені макаки отримали токсичні дози індраліну i.m. (800 та 1000 мг кг –1).

Визначення радіопротекторної дії індраліну

Радіозахисні властивості індраліну оцінювали на підставі аналізу виживання тварин протягом 60 днів після опромінення та наявності клінічних симптомів гострого променевого синдрому (ГРС). Зміни маси тіла та ректальної температури контролювали. Ми також обстежили область живота пальпацією, оцінили легеневу функцію, спостерігаючи за диханням, та візуально оглянули шкіру та слизові оболонки, включаючи ротову порожнину та анальну область. Кількість лейкоцитів, тромбоцитів, еритроцитів та ретикулоцитів, значення гемоглобіну та швидкість осідання еритроцитів (ШОЕ) визначали з периферичної крові тварин. Клінічними проявами гострого променевого ураження кишечника були діарея та напруга живота. Ці симптоми були очевидні з 5–10 днів. Під час продромального періоду спостерігали за допомогою реєстрації блювоти, діареї та рухових та поведінкових розладів протягом першої доби після опромінення. Токсичні дози індраліну базувались на клінічних ознаках отруєння та смерті тварин протягом трьох днів після лікування.

Статистичний аналіз

Дані виражаються як середнє значення ± стандартна помилка. Наявність радіозахисного ефекту оцінювали шляхом аналізу кривої виживання за допомогою методу Каплана – Мейєра (F-тест Кокса). Статистичний аналіз проводили за допомогою комп’ютерної програми „Statistica” версії 7. Статистичну ймовірність визначали за допомогою непараметричного U-критерію Манна – Уітні з мінімальним об’ємом вибірки три, двостороннім точним тестом Фішера та дисперсійним факторіальним аналізом . Р-значення Рис.1. 1. Після гамма-опромінення 6,8 Гр (LD100/30; потужність дози 22,8 cGy хв –1), i.m. введення індраліну в дозі 120 мг кг –1 захистило п’ять з шести мавп порівняно зі смертю всіх 10 тварин контрольної групи опромінення (Р –1), радіаційно-захисний ефект індраліну дорівнював 50% (три з шести мавп вижили). Після введення 60 мг кг –1 кожна з чотирьох мавп вижила до 60-го дня експерименту. Індралін у дозі 40 мг кг –1 був неефективним, і три експериментальні тварини загинули від ГРЗ. ED50 індраліну у мавп, які зазнали гамма-опромінення (LD100/30) протягом 30 хв, дорівнював 77,3 (63,3–94,3) мг кг –1. Індралін знижував тяжкість летальних ушкоджень у мавп до легкого перебігу ГРЗ.