Диференціальна експресія miR-200c у стовбурових клітинах раку молочної залози

Діджун Ву

1 відділення променевої терапії, Наньтунська перша лікарня, м. Наньтун, провінція Цзянсу, 226000, Китай,

стовбурових

Нін Цзі

1 відділення променевої терапії, Наньтунська перша лікарня, м. Наньтун, провінція Цзянсу, 226000, Китай,

Лей Чжан

1 відділення променевої терапії, Наньтунська перша лікарня, м. Наньтун, провінція Цзянсу, 226000, Китай,

Лян Чжан

2 Онкологічне відділення, Наньтунська перша лікарня, м. Наньтун, провінція Цзянсу, 226000, Китай,

Анотація

Рак молочної залози став найпопулярнішим злоякісним новоутворенням у жінок. Стовбурові клітини раку молочної залози (BCSC) відіграють важливу роль у метастазуванні та рецидивах. Попереднє дослідження показало тісний взаємозв'язок між miR-200c та поведінковою регуляцією стовбурових клітин раку молочної залози. Це дослідження мало на меті дослідити диференційовану експресію miR-200c у стовбурових клітинах раку молочної залози та його роль у регуляції властивостей утворення пухлини. Аналіз мікрочіпів ДНК та qRT-PCR аналізували диференційну експресію мікроРНК між BCSC та клітинами NTG без пухлин. Біоінформатика та аналіз репортерного гена люциферази визначали цільову ділянку miR-200c. Мімік MiR та інгібітор трансфікували для зміни рівня експресії miR-200c, а потім Вестерн-блот для виявлення експресії гена BMI1. Клональний аналіз клітин визначав проліферацію клітин, тоді як ксенотрансплантат пухлини проводили для аналізу потенції формування пухлини. MiR-200c був знижений в BCSC в порівнянні з клітинами NTG (P Ключові слова: Стовбурові клітини раку молочної залози, мікроРНК-200с, проліферація клітин, утворення пухлини

Вступ

Статистика показала рак молочної залози як найпопулярнішу специфічну злоякісну пухлину серед жінок і займає близько 29% усіх видів раку серед жінок [1]. Окрім хіміотерапії та заміщення гормонів, хірургічна допомога залишається основною стратегією лікування, головним підходом якої є хіміотерапія [2]. Поширені хіміотерапевтичні реагенти, включаючи доцетаксел та адріаміцин, часто призводять до стійкості до лікарських засобів, що суттєво порушує ефективність лікування та збільшує навантаження на пацієнта [3,4]. Тому вивчення механізму, що лежить в основі лікарської стійкості раку молочної залози, має вирішальне значення для підвищення ефективності лікування та зменшення тягаря пацієнта.

Стовбурові клітини пухлини - це певний підтип клітин у солідних пухлинах, що мають потенцію самовідновлення, що спричиняє неоднорідність пухлин [5]. Стовбурові клітини пухлини мають декілька ознак, подібних до характеристик нормальних стовбурових клітин. Дослідження показали важливу роль стовбурових клітин пухлини у множинній патології та клітинній поведінці злоякісних пухлин [6]. Самообновлення та швидке розмноження стовбурових клітин пухлини є критично важливими для підтримання та рецидиву пухлини. Тим часом численні механізми всередині стовбурових клітин пухлини тісно корелюють із стійкістю до лікарських засобів після рутинного лікування пухлини [7,8]. Тому вивчення поведінкової регуляції стовбурових клітин злоякісних пухлин та пов'язаного з ними механізму мають вирішальне значення для визначення ефективного лікування проти злоякісних пухлин, включаючи рак молочної залози.

MiR-200c належить до сімейства мікроРНК. Попереднє дослідження показало, що мікроРНК може впливати на поведінку кількох клітин через механізм інтерференції РНК [9]. Аналізуючи профіль експресії мікроРНК клітин злоякісних пухлин, було встановлено, що він відіграє важливу роль у регулюванні поведінки клітин злоякісної пухлини [10]. Нещодавно дослідження показало важливу роль мікроРНК у регуляції клітин злоякісних пухлин, оскільки miR-200c та miR-222 мали ненормальний рівень експресії в клітинних лініях раку молочної залози з резистентністю до лікарських засобів [11,12]. Це дослідження мало на меті дослідити диференційовану експресію miR-200c у стовбурових клітинах раку молочної залози (BCSC) та пов'язаний з ним механізм.

Матеріали і методи

Матеріали

BCSC та непухлинні утворення клітини раку молочної залози NTG, а також клітини HEK293 були придбані в Китайській медичній академії. Поживне середовище DMEM, пеніцилін та стрептоміцин були придбані у Gibco (США). Набір для вилучення РНК був придбаний у компанії Qiagen (США). Покращене середовище DMEM було придбано в Invitrogen (США). Модель сканера мікрочіпів GCS3000 та тестовий масив miRNA4.0 були придбані у компанії Affymetrix (США). MirVanat qRT-PCR мікроРНК набори для тестування були придбані у Ambion (США). ПЛР у режимі реального часу був придбаний у Bio-Rad (США).