Гомогенат - огляд тем ScienceDirect

Гомогенати можна отримати шляхом здавлювання та розтирання тканини в поліетиленовому пакеті або за допомогою перистальтичного блендера.

Пов’язані терміни:

Антитіла
Фермент
Білок
ДНК
LD50
Супернатант
Іон кальцію

Завантажити у форматі PDF

Про цю сторінку

Системи гормональної поведінки не ссавців

Грегорі Ф. Болл, Жак Бальтазарт, у "Гормони, мозок і поведінка" (третє видання), 2017

2.11.6.4.1 Дослідження in vitro

Було показано, що активність ароматази в передоптичних гомогенатах перепелів швидко пригнічується фосфорилюючими умовами (зростає у фізіологічному діапазоні концентрацій АТФ, Mg 2+ та Са 2+), і цей процес блокується у присутності різних інгібіторів протеїнкінази. Це інгібування було скасовано в присутності 1 мМ EGTA, який хелатує вільний Ca 2+, присутній у гомогенатах (Balthazart et al., 2001a, 2003).

Аналіз гена ароматази у різних видів ссавців та птахів, включаючи перепелів, продемонстрував, що в цих послідовностях ароматази присутні кілька консенсусних місць фосфорилювання (залишки тирозину та серину/треоніну) (детально див. У Balthazart et al., 2003; Charlier et al. ., 2011а). Додаткові дослідження продемонстрували, що ці процеси фосфорилювання також знижують ферментативну активність ароматази в яєчнику перепелів та людської ароматази, трансфікованої в різних клітинних лініях, і що знижена активність пов’язана з посиленим фосфорилюванням білка ароматази. Спроби ідентифікувати шляхом сайт-спрямованого мутагенезу специфічні амінокислотні залишки, фосфорилювання яких опосередковує зміни ферментативної активності, проте не мали успіху (Charlier et al., 2011a).

Дослідження з використанням експлантів in vitro POA-гіпоталамуса також показали, що швидкі інгібування (протягом 5 хв) ароматази, імовірно (хоча це формально не демонструється), опосередковані фосфорилюванням, залежним від Ca 2+, також мають місце в інтактних нейронах. Ці інгібування можуть бути викликані деполяризацією, індукованою K +, впливом тапсигаргіну, лактону, відомого своєю здатністю мобілізувати внутрішньоклітинні басейни Са 2+, або впливом агоністів рецепторів глутамату (AMPA (аміно-метил-4-ізоксазол пропіонік кислоти), каїнату та меншою мірою NMDA (N-метил-d-аспарагінова кислота)) і є повністю оборотними (Balthazart et al., 2001a, 2006). Активність ароматази людини, трансфікована в спочатку негативні клітинні лінії, аналогічним чином знижувалася під дією K + -індукованої деполяризації та повністю відновлювалася протягом періоду змиву. Цікаво, що дослідження Вестерн-блот продемонстрували, що знижена ферментативна активність в умовах деполяризації не відповідає зменшенню концентрації ферментативного білка, викликаному, наприклад, розкладанням (Charlier et al., 2011a).

КОНСЕРВАНТИ | Аналіз

Інші консерванти

Біфеніл

Парова дистиляція гомогенатів шкірки цитрусових і екстракція дистиляту гептаном забезпечує зразок, який можна аналізувати на біфеніл методом ТШХ на силікагелі з гептаном як розчинником, що розвивається. Кількісний аналіз проводиться шляхом вилучення біфенілу із середовища ТШХ етанолом та вимірювання поглинання отриманих розчинів при 248 та 300 нм. Поглинання при 300 нм використовується для корекції фонової поглинання. Також доступні методи аналізу GLC.

Тіабендазол

Тіабендазол може бути вилучений з їжі з кислотою (HCl), в якій він згодом відновлюється цинком у 30% гліцерині + фенілендіаміну. Подальше окислення іонами заліза дає синій комплекс, який екстрагується в бутанол для спектрофотометричного вимірювання.

Молочна кислота

Стандартні методи визначення молочної кислоти передбачають її перетворення в комплекс Fe (III) для спектрофотометричного вимірювання або методом ГЖХ після повного метилювання. За допомогою ферментативної процедури молочна кислота перетворюється в піруват за допомогою NAD + (лактатдегідрогенази); продукт потрапляє в пастку, реагуючи з глутаматом (глутамат-піруват-трансаміназа) з метою зміщення рівноваги молочнокислої кислоти та пірувату праворуч. Швидкість використання НАД + використовується для вимірювання концентрації молочної кислоти. Приготування зразків, як правило, описано для карбонових кислот вище.

Перекис водню

Точкові тести на наявність перекису водню в молоці використовують або розчин пентоксиду ванадію в H2SO4 (рожевий або червоний колір) або KI/крохмаль (синій колір).

Кількісний аналіз проводиться за допомогою пероксидази та відповідного субстрату. Часто рекомендований о-діанізидин є канцерогенним, і такі субстрати, як гваякол або 2,2'-азинобіс (3-етилбензтіазолідин-6-сульфонова кислота), є кращими. Випробування на зразках молока проводять після осадження білка шляхом регулювання рН до 4,5 за допомогою HCl.

Нісін

Складність процедур виділення та хімічної кількісної оцінки нізину призвела до розробки мікробіологічних аналізів як звичайних процедур аналізу. Однією з міжнародних одиниць активності нізину є ступінь пригнічення випробовуваного мікроорганізму, спричиненого приблизно 25 нг чистого нізину. Підходящим тестовим мікроорганізмом є Streptococcus agalactiae. Конкретна процедура аналізу - це адаптація тесту відновлення метиленового синього; затримка знебарвлення барвника пропорційна концентрації нізину в 10-кратному діапазоні концентрацій. Новий метод аналізу включає імуноферментний аналіз, який набагато простіший, ніж мікробіологічний, і повинен стати популярним.

Ниркова токсикологія

КГ. Дікман, А.П.Гроллман, у Комплексній токсикології, 2010

7.18.4.2.4 Токсикокінетика

На відміну від мінливої присутності в сечі та крові, ореланін часто виявляють у зразках ниркової біопсії, де токсин може зберігатися у розчинній формі протягом 6 місяців після прийому (Andary et al. 1989; Franz et al. 1996; Holzl et al. 1997; Rohrmoser et al. 1997). Орелін, ди-редукційний метаболіт, також був знайдений у біопсіях нирок у випадках отруєння ореланіном, і, імовірно, походить або від самого гриба, або від поза- або внутрішньониркового метаболізму ореланіну. Продовження присутності ореланіну в корі нирок після гемодіалізу та його стійке перебування в цій тканині протягом декількох місяців за відсутності виявленого ореланіну в сечі чи крові свідчить про те, що токсин секвеструється в нирках у погано обмінній формі. Подібні спостереження були зроблені in vitro, де можна було відновити лише 25% ореланіну, доданого до гомогенату нирок, порівняно з повним відновленням при додаванні до сироватки (Holmdahl et al. 1987).