Хронічне фармакологічне пригнічення EGFR призводить до серцевої дисфункції у мишей C57BL6J
Корделія Дж. Баррік
кафедра генетики Університету Північної Кароліни, Чапел-Хілл, штат Північна Кароліна 27599
b Навчальна програма з токсикології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Гілл, штат Північна Кароліна 27599
Мін Ю.
кафедра генетики Університету Північної Кароліни, Чапел-Хілл, штат Північна Кароліна 27599
c Програма з усної біології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Гілл, штат Північна Кароліна 27599
Ханн-Сянг Чао
d Навчальна програма з генетики та молекулярної біології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Гілл, штат Північна Кароліна 27599
Девід В. Тредгілл
кафедра генетики Університету Північної Кароліни, Чапел-Хілл, штат Північна Кароліна 27599
b Навчальна програма з токсикології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Гілл, штат Північна Кароліна 27599
c Програма з усної біології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Гілл, штат Північна Кароліна 27599
d Навчальна програма з генетики та молекулярної біології, Університет Північної Кароліни, Чапел-Хілл, штат Північна Кароліна 27599
Анотація
Вступ
Рецептор епідермального фактора росту (EGFR) є прототипом члена сімейства рецепторів тирозинкіназ ERBB, який також включає ERBB2, ERBB3 і ERBB4 (Wells, 1999). Зв’язування лігандів індукує гомо- або гетеродимеризацію рецепторів з подальшим фосфорилюванням залишків тирозину в карбокси-кінцевому хвості, створюючи місця стикування, що ініціює внутрішньоклітинні сигнальні каскади (Schlessinger, 2000). Було підраховано, що посилення або конститутивна передача сигналів через EGFR відбувається приблизно у третини всіх новоутворень людини; крім того, аберрантна сигналізація пов’язана з поганим прогнозом, включаючи відсутність реакції на традиційну хіміотерапію та зниження виживання (Salomon et al., 1995; Woodburn, 1999; Nicholson et al., 2001).
З тих пір, як EGFR вперше був запропонований як цільовий препарат проти раку майже двадцять років тому (Sato et al., 1983; Gill et al., 1984; Masui et al., 1984), досягнення в галузі розкриття лікарських препаратів дали безліч інгібіторів, спрямованих на рецептор. Зокрема, інгібітори тирозинкінази (TKI), які блокують активність EGFR, конкуруючи з аденозинтрифосфатом (АТФ) за зв’язування з киназою кишені рецептора, показали ефективність для декількох типів раку (Jimeno and Hidalgo, 2006). Два ІФІ EGFR, Gefitinib/Iressa (AstraZeneca) та Erlotinib/Tarceva (OSI Pharmaceuticals), отримали схвалення регуляторних органів для використання у хворих на рак, тоді як деякі інші оцінюються в поточних клінічних випробуваннях як моно- або комбінаторні терапії (Marshall, 2006; Steeghs et al., 2007). Із величезними успіхами, досягнутими в терапії раку, і наслідком збільшення тривалості життя після діагнозів, деякі види раку зараз сприймаються і трактуються як хронічні, а не термінальні захворювання (Disis and Rivkin, 2003; Michener and Belinson, 2005; Markman, 2006; Burton et al., 2007; Snyderman, 2007). Хоча побічні ефекти цілеспрямованої терапії, такі як ІТК, вважаються незначними порівняно з традиційними хіміотерапевтичними препаратами, тепер пацієнти можуть піддаватися дії цих препаратів роками, а не місяцями. Однак довгострокові фізіологічні наслідки пригніченої активності EGFR невідомі.
Матеріали і методи
1) Тварини та фармакологічне лікування
Аналіз кишкової пухлини
У віці трьох місяців мишей B6-Apc Min/+ евтаназували та видаляли шлунково-кишкові шляхи від пілорусу до прямої кишки. Тонку кишку розрізали на третини, а сліпу кишку і товсту кишку відокремили. Сегменти обережно промивали PBS, щоб видалити фекальний матеріал, розрізали поздовжньо, розпилювали на 3 мм папір Whatmann і фіксували на ніч при 4 ° C у 4% параформальдегідіді. Поліпи підраховували та вимірювали їх діаметри за допомогою дисекційного мікроскопа з мікрометром, що дозволяє розпізнати поліпи діаметром більше 0,3 мм.
Ехокардіографія
Трансторакальну ехокардіографію (ТТЕ) проводили на початковому рівні та перед жертвою за допомогою зонда 30 мГц на ультразвуковому знімку Vevo 660 (VisualSonics). Мишей дикого типу В6 злегка знеболювали за допомогою 1-1,5% ізофторану та місцевого депілятора, що застосовували перед тим, як помістити в ліве бічне пролежне положення під теплову лампу для підтримки температури тіла на рівні 37 ° С. Частота серцевих скорочень підтримувалась від 450 до 500 ударів на хвилину. Отримані двовимірні короткі та довгі осі лівого шлуночка. Реєстрації М-режиму реєстрували і використовували для визначення кінцевого діастолічного діаметра лівого шлуночка (ЛШ) (ЛШВ, d), кінцевого систолічного діаметра ЛШ (ЛШВ, с), діастоли товщини задньої стінки ЛШ (LVPWTh, d) та товщини задньої стінки ЛШ систола (LVPWTh, s) протягом трьох серцевих циклів. Фракційне вкорочення НН розраховували за формулою% FS = (LVED, d-LVED, s)/(LVED, s). Всі вимірювання проводились двома незалежними спостерігачами, засліпленими для групи лікування.