Інфекція Cryptosporidium varanii у леопардових геконів (Eublepharis macularius) в Аргентині
А. Делларупе
1 Laboratorio de Inmunoparasitología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900 La Plata, Аргентина
2 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Буенос, Айрес, Аргентина
Дж. М. Унзага
1 Laboratorio de Inmunoparasitología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900 La Plata, Аргентина
Г. Море
1 Laboratorio de Inmunoparasitología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900 La Plata, Аргентина
2 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Буенос, Айрес, Аргентина
М. Кінаст
3 Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET), CCT La Plata, CONICET, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Argentina
А. Ларсен
4 Cátedra de Inmunología Veterinaria, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Argentina
К. Штібель
5 Dpto. Зооноз, Муніципалідад Граль. Сан-Мартін, пров. де Буенос-Айрес, Аргентина
М. Рамбо
1 Laboratorio de Inmunoparasitología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900 La Plata, Аргентина
2 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Буенос, Айрес, Аргентина
M.C. Вентуріні
1 Laboratorio de Inmunoparasitología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900 La Plata, Аргентина
Анотація
Криптоспоридіоз спостерігається у плазунів з високою захворюваністю та значною смертністю. Метою цього дослідження було досягнення молекулярної ідентифікації Cryptosporidium spp. у домашніх домашніх леопардових геконів (Eublepharis macularius) з колонії селекціонерів в Буенос-Айресі, Аргентина. Ооцисти, порівнянні з оцистами Cryptosporidium spp. були виявлені у трьох геконів з діареєю, анорексією та кахексією в анамнезі. Молекулярні методи ідентифікації підтвердили наявність Cryptosporidium varanii (син. C. saurophilum). Цей агент вважався основною причиною спостережуваного клінічного захворювання. Це перший опис інфекції C. varanii у рептилій домашніх тварин в Аргентині.
Вступ
Рептилії стають популярними домашніми тваринами у всьому світі; однак про наявність та контроль криптоспоридіозу у цієї популяції тварин відомо мало. За останні кілька років криптоспоридіоз спричинив великі економічні втрати для комерційних заводчиків рептилій. Отже, метою цього дослідження було провести молекулярну характеристику Cryptosporidium spp. від природного зараженого леопардового геккона (Eublepharis macularius) в Аргентині.
Матеріали і методи
Тварини та зразки
Зібраний зразок стільця з 3 леопардових геконів (E. macularius) було зібрано та передано в Університет Ла-Плата для молекулярних досліджень. Три гекони (дві самки та 1 самець) (рис. 1) були отримані ветеринарними лікарями з колонії селекціонерів у Буенос-Айресі, Аргентина, в анамнезі діарея, анорексія та кахексія. Зразки фекалій спочатку поміщали в 15-мл пробірку. Пробірку частково заповнювали розчином сахарози і перемішували у вихорі протягом приблизно 5 секунд. кожну пробірку центрифугували при 252 г протягом 10 хв. Аліквоту брали з поверхні, розкладали на предметне скло і досліджували на наявність Cryptosporidium spp. ооцисти за допомогою світлової мікроскопії (Deming et al., 2008). Модифіковане пляма Зіля-Нельсена для мазків калу проводили, по суті, як описано раніше (Henriksen and Pohlenz, 1981); було виявлено кілька круглих ооцист діаметром 4-5 мкм, сумісних з Cryptosporidium spp. (Рис. 2). Зібраний зразок піддавали технології флотації цукру (розчин сахарози без формальдегіду) та осідання води, як описано раніше для концентрації кокцидових ооцист (Ortega-Mora et al., 2007). Концентровані ооцисти ресуспендували в 450 мкл вільної від нуклеази води.
Три леопардові гекони (дві самки та 1 самець), отримані ветеринарними лікарями з колонії селекціонерів у Буенос-Айресі, Аргентина, з діареєю, анорексією та кахексією
Мазок калу з леопардових геконів (модифікована методика Зіля-Нельсена): круглі ооцисти діаметром 4-5 мкм, сумісні з Cryptosporidium spp.
Вилучення ДНК
Руйнування ооцисти та очищення ДНК із зразка фекалію (обробленого у трьох примірниках) проводили за допомогою комерційного набору стільця ДНК (Міні-комплект стілець ДНК для стілець QIAamp, Qiagen, Hilden, Німеччина) відповідно до рекомендацій виробника. Контрольний зразок процесу (розчини набору для екстракції та 150 мкл води, що не містить нуклеази) оцінювали разом із зразками стільця.