Ізомер амфетаміну, ефективність та безпека якого у людей ніколи не вивчалася,

Медичний факультет Гарвардської медичної школи, Бостон, Массачусетс, 02115 США

Cambridge Health Alliance, Somerville, MA 02143 USA

Листування: Пітер Коен, доктор медицини, 236 Highland Ave, Сомервілл, Массачусетс 02143, США. Електронна пошта: [email protected]

Хімічний факультет Гаверфордського коледжу, Гаверфорд, Пенсильванія, 19041 США

Кафедра лабораторної медицини Каліфорнійського університету, Сан-Франциско, Каліфорнія, 94143 США

Медичний факультет Гарвардської медичної школи, Бостон, Массачусетс, 02115 США

Cambridge Health Alliance, Somerville, MA 02143 USA

Хімічний факультет Гаверфордського коледжу, Гаверфорд, Пенсильванія, 19041 США

Кафедра лабораторної медицини Каліфорнійського університету, Сан-Франциско, Каліфорнія, 94143 США

Анотація

Вступ

У Сполучених Штатах Америки (США) Управлінню з контролю за продуктами та ліками США (FDA) доручається виявляти та виводити з ринку неправильно марковані, фальсифіковані та небезпечні харчові добавки. 1 Ступінь, до якої FDA застосовує закон, невідома.

Зараз продаються найнебезпечніші добавки, що містять синтетичні стимулятори, що не мають доказів безпеки для людей. 2-5 Нещодавно було виявлено, що добавки містять аналоги амфетаміну, метамфетаміну та 1,3-диметиламіламіну (DMAA). 6-9 Єдиним відомим джерелом цих стимуляторів є хімічний синтез; однак їх часто продають так, ніби це рослинні екстракти. Наприклад, аналог метамфетаміну, ,α‐Діетилфенілетиламін (DEPEA) був позначений як екстракт дендробієвої орхідеї, а 1,3-диметилбутиламін (DMBA) продавався так, як ніби екстракт чаю Pouchung. 6, 7

Ще одним стимулятором, який нещодавно був введений у добавки і продається так, ніби це рослинний екстракт, є β-метилфенілетиламін (BMPEA, малюнок 1). 8 BMPEA був синтезований у 1930-х роках як потенційна заміна амфетаміну. 10, 11 Однак з невідомих причин дослідження ефективності та безпеки у людей ніколи не проводились, і BMPEA ніколи не вводився як фармацевтичний препарат. BMPEA залишався відомим лише як дослідна хімічна речовина до початку 2013 року, коли FDA визначила BMPEA у кількох добавках, позначених як такі, що містять „Acacia rigidula“, хоча стимулятор ніколи не був ідентифікований та не витягнутий із Акація ригідула, чагарник, родом з Техасу. 8 Більше ніж через два роки після відкриття FDA, FDA ще не попередила споживачів про наявність ізомеру амфетаміну в добавках.

Це невідомо після опублікованого FDA дослідження Акація ригідула добавки, якщо виробники вилучили BMPEA з Акація ригідула добавки. Ми придбали Акація ригідула добавки, що продаються в США більше року після відкриття FDA та проаналізували добавки на наявність та кількість BMPEA.

Матеріали і методи

Матеріали

Довідковий стандарт для BMPEA був придбаний у Sigma (Сент-Луїс, Міссурі, США), тоді як амфетамін-d5, який використовувався як внутрішній стандарт, був отриманий від Cerilliant (Round Rock, TX, США). Всі розчинники, включаючи метанол і воду, мали рідинну хроматографію-мас-спектрометрію (LC-MS) і були отримані від Honeywell Burdick and Jackson (Muskegon, MI, USA). Вихідні розчини стандартів BMPEA готували з дозою 1 мг/мл, розподіляли на порції по 1 мл у бурштинових ампулах і зберігали при -80 o C. Усі калібрувальні стандарти в концентрації від 50 до 5000 нг/мл готували із вихідного розчину.

Приладобудування

Всі аналізи проводили за допомогою рідинної хроматографії - квадрупольного часу польоту/мас-спектрометрії (LC ‐ QTOF/MS). Для запуску елюентної градієнтної хроматографії використовували систему Agilent LC 1260 Infinity Binary LC System, оснащену бінарним насосом, який може подавати 600 бар. Agilent 6550 iFunnel QTOF/MS був використаний для виявлення BMPEA з використанням джерела іонізації з електророзпиленням з подвійним небулайзером, що дозволяє постійно вводити еталонну масу під час пробіжок.

Забір та підготовка зразків

Дієтичні добавки відповідали нашим критеріям включення, якщо вони: (1) позначені як містять Акація ригідула та (2) доступні для продажу в Інтернеті в США з січня по квітень 2014 р. Усі добавки були придбані через Інтернет.

Дві капсули, таблетки або совки кожної харчової добавки аналізували за допомогою LC-QTOF/MS (Agilent LC 1260‐ QTOF 6550). Загальний вміст кожної проби зважували за допомогою аналітичних ваг (Sartorius CP124S). Кожну копію зразка розчиняли в достатній кількості метанолу, щоб отримати розчин, що представляє собою розчинні компоненти, у 50 мг добавки на мл екстрагуючого розчинника. З цього вихідного розчину готували розведення 1 мг/мл, 100 мкг/мл, 10 мкг/мл, 1 мкг/мл та 100 нг/мл у 10% метанолі. Останні три розведення використовували в аналізі LC-QTOF/MS.

Хімічний аналіз

Розведений зразок 2,5 мкл вводили у колонку Agilent Poroshell 120 C ‐ 18 (2,1X 100 мм, 2,7 мкм), витримувану при 55 ° C, у кожному дослідженні LC-QTOF/MS. Хроматографічне розділення було досягнуто шляхом градієнтного елюювання з використанням води марки LC ‐ MS з 0,05% мурашиною кислотою та 5 мМ формою амонію як рухомої фази A та метанолу з 0,05% мурашиної кислоти як рухомої фази B. Використовуваний градієнт елюції становив 0–0,5 хв 5% В; 1,5 хв = 30% В; 4,5 хв = 70% В; 7,5 хв = 100% В; 7,5–10 хв = 100% В; і 10,01–12 хв = 5% В.

Елюати з хроматографічної колонки іонізували в QTOF/MS, використовуючи джерело іонізації електророзпилювачем, що працювало в таких умовах: температура газу при 225 ° C; температура газів-оболонок при 350 ° C; витрата сушильного газу при 14 л/хв; витрата газу оболонки при 11 л/хв; тиск небулайзера при 14 psi; обмеження напруги при 3000В; і напруга сопла при 500В. Збір даних здійснювався на частоті 2 ГГц у режимі розширеного динамічного діапазону. Спектри TOF-MS та MS/MS збирали в автоматизованому режимі MS/MS, використовуючи 500 довільних одиниць як поріг для індукції збору даних MS/MS. Кожен зразок запускали з позитивною полярністю і вводили три окремі рази.