Межі Швидкий розвиток та характеристика специфічної лінії транслокації хромосом

Селекція рослин

Редаговано
Родоміро Ортіс

Шведський університет сільськогосподарських наук, Швеція

Переглянуто
Ізабель Колас

Інститут Джеймса Хаттона, Великобританія

Галина Суворова

Всеросійський науково-дослідний інститут бобових та круп'яних культур, Росія

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

швидкий

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 Національний агропродовольчий біотехнологічний інститут, Мохалі, Індія
  • 2 Об’єднана вища школа сільського господарства, Університет Тотторі, Тотторі, Японія
  • 3 Північно-західний інститут біології плато (CAS), Цинхай, Китай
  • 4 Індійський інститут досліджень пшениці та ячменю, Індійська рада сільськогосподарських досліджень, Карнал, Індія

Вступ

Матеріали і методи

Рослинні матеріали

Рослинні матеріали, використані в цьому дослідженні, включали (1) лінію дисомічного додавання Ч елонгатум хромосома 1Е і дизомічна лінія заміщення Ч. елонгатум хромосома 1E з хромосомою 1D пшениці, як на тлі китайської весни (CS), (2) генетичні запаси нулі для хромосоми 1A, так і тетра для хромосоми 1D (N1AT1D), N1AT1B, N1BT1A, N1BT1D та N1DT1B на тлі CS та (3) чотири сорти: канадський твердий AcDomain, японський Norin 61 (N61), індійський PBW343, сирійський Cham 6 твердих.

Генерація лінії транслокації, специфічної для хромосом

Пошук хромосомних специфічних білкових маркерів здійснювався за електрофоретичними характеристиками білків глютеніну та гліадину Ч. елонгатум лінії додавання та заміщення та генетичні шкарпетки нулі тетра CS. Для створення лінії транслокації DSL-1E (1D) взаємно схрещували з N1AT1D, щоб створити подвійну моносоміку для хромосом 1E і 1A. Покоління F1 схрещували/зворотно схрещували з сортами N61, CHAM6, PBW343, AcDomain та Ph Я мутантна лінія (сприяють гомеологічному сполученню та рекомбінації). Відбір базувався на наявності HMW-GS та відсутності гліадинів з Ч. елонгатум та відсутність кодованих гліадинів 1AS у пшениці. Підтвердження транслокації проводили за допомогою аналізу GISH. Були відібрані рослини з високою енергією та проведені додаткові цикли схрещування/зворотного схрещування та самоконтролю.

Характеристика білка

Білки для зберігання насіння послідовно екстрагували згідно з Smith and Payne (1984) із модифікаціями. Спочатку екстракцію гліадину проводили 1,5 М DMF (диметилформамід), потім екстракцію глютеніну 50% ізопропанолом, 50 мМ TrisHCl (pH 7,5), 2% DTT. Поділ глютенінів проводили на 10% поліакриламідному гелі. Гліадини розділяли на 15% поліакриламідних гелях.

Високоефективна рідинна хроматографія з оберненою фазою (RP-HPLC)

RP-HPLC відокремлених білків гліадину та глютеніну проводили згідно з Mejias et al. (2014) з деякими змінами. Поділ білків проводили з використанням аналітичної колонки з оберненою фазою C8 Zorbax 300SB-C8 (Agilent Technologies) з розміром частинок 5 мкм та діаметром частинок 300 Å, довжиною 250 мм, внутрішнім діаметром 4,6 мм з рідинною хроматографією Agilent 1260 Infinity. Детектором був діодний масив УФ-віс детектор і поглинання було виявлено при 210 нм. Об'єм ін'єкції становив 20 мкл. Лінійний градієнт встановлювали з використанням розчинників A (0,1% TFA в MQ) і B (0,1% TFA в ацетонітрилі), а температуру колонки встановлювали на рівні 60 ° C. Глютеніни розділяли при лінійному градієнті 25–44% B протягом 120 хв, 44–50% B протягом 5 хв і, нарешті, 50–65% B протягом 5 хв. Гліадини відокремлювали від 20 до 65% В протягом 120 хв, а потім від 65 до 75% В протягом 20 хв.