Повна стаття Миші C57BL6JRj для літніх людей не страждають ожирінням під впливом дієти західного типу

Науково-дослідна робота

  • Повна стаття
  • Цифри та дані
  • Список літератури
  • Цитати
  • Метрики
  • Ліцензування
  • Передруки та дозволи
  • PDF

АНОТАЦІЯ

Ожиріння стало глобальною загрозою здоров’ю для кожної вікової групи. Добре відомо, що молоді миші (віком 10-12 тижнів), які харчуються дієтою західного типу (ЗЗ), страждають ожирінням і розвивають більш високий рівень холестерину та стеатоз печінки, тоді як чутливість до інсуліну знижується. Однак менше відомо про вплив СД на мишей похилого віку. Тому 10-тижневих (молодих) та 22-місячних (старшого віку), самців мишей C57BL/6JRj утримували або на WD, або на контрольній дієті (SFD) протягом 15 тижнів. На відміну від молодих мишей, миші похилого віку на ВД не виявляли більшої маси тіла або маси жирової тканини (АТ), що свідчить про захист від ожиріння, спричиненого дієтою. Крім того, рівні адипонектину та лептину у плазмі не впливали на годування ВД. Однак WD індукував більше печінкового накопичення ліпідів, а також посилював печінкову експресію маркера макрофагів F4/80 у мишей похилого віку. Не було суттєвих відмінностей у рівнях мРНК роз’єднання білка-1 або F4/80 у коричневих AT (BAT) або кількох маркерів кишкової цілісності в товстій кишці, що свідчить про те, що захист від ожиріння не обумовлений надмірною BAT або порушенням кишкового всмоктування жиру . Таким чином, миші похилого віку, на відміну від своїх молодших колег, виявилися захищеними від ожиріння, спричиненого дієтою.

повна

Вступ

Матеріали і методи

Тварина модель

Опубліковано в Інтернеті:

Таблиця 1. Склад дієт.

Аналізи

Концентрацію глюкози в крові вимірювали за допомогою смужок Glucocard (28 350, Menarini Diagnostics), а тригліцериди та холестерин у плазмі крові оцінювали за допомогою звичайних клінічних досліджень. Рівні інсуліну в плазмі (Mercodia), адипонектину (R&D Systems) та лептину (DY498, R&D Systems) вимірювали за допомогою комерційно доступних ІФА. Індекс інсулінорезистентності (HOMA-IR-) оцінювали гомеостатичною моделлю наступним чином: рівні глюкози натще (мМ) x рівні інсуліну натще (мО/л)/22,5. Вміст тригліцеридів у печінці та BAT визначали кількісно за допомогою набору тригліцеридів FS * (Diasys) після підготовки тканини печінки, як описано раніше [6]. Коротко кажучи, 30 мг тканини інкубували протягом ночі при 55 ° C у спиртовому КОН (2: 3 60 мл EtOH 99% + 30 мл 30% КОН) до завершення травлення. Наступного дня до розщеплених зразків додавали 1 М MgCl2 (1: 1, об./Об.). Після 10 хв інкубації на льоду та подальшого центрифугування супернатант відсмоктували та аналізували за допомогою набору тригліцеридів FS * (Diasys). Рівні лактатдегідрогенази (LDH) оцінювали за допомогою набору для аналізу LDH (Abcam) відповідно до інструкцій виробника.

Вестерн-блот

Вестерн-блотинг для роз’єднання білка-1 (UCP-1) проводили, як описано раніше [7]. Коротко, жирову тканину BAT гомогенізували за допомогою риболізатора FastPrep (MP Biomedicals) у буфері, що складається з 10 мМ фосфату Na, рН 7,2, 150 мМ NaCl, 1% тритону, 0,1% додецилсульфату натрію (SDS), 0,5% Na дезоксихолату, 0,2 % NaN3 та коктейль інгібітора протеази (Thermo Fischer Scientific). Для визначення концентрації білка використовували аналіз білка BCA (Pierce). Потім рівну кількість білка завантажували на 10% SDS-PAGE. Гелі переносили на мембрану нітроцелюлози 0,45 мкм і блокували у 5% нежирному сухому молоці (Bio-Rad) у 10 мМ буфері Tris-HCl зі 150 мМ NaCl та 0,5% Tween 20 pH 7,6 протягом 3 год. Далі мембрану зондували антитілом до UCP-1 (Sigma-Aldrich). Для контролю навантаження використовували β-актин. Потім додавали кон'юговане з пероксидазою хрону вторинне антитіло до TBST, що містить 5% нежирного сухого молока. Сигнали виявляли за допомогою посиленої хемілюмінесценції (Thermo Fischer Scientific). Аналіз проводили із зображенням J (NIH).

ПЛР у режимі реального часу

Аналізи експресії генів TaqMan (Thermo Fischer Scientific Inc.) використовували для аналізу рівнів мРНК кількох генів у тканинах печінки та товстої кишки та НДТ за допомогою кількісної RT-PCR (таблиця 2), згідно з протоколом, описаним раніше [8]. Коротко, вилучення РНК із тканин проводили за допомогою міні-набору RNeasy (Qiagen, Базель, Швейцарія) згідно з інструкціями виробника. Десять нанограм/мікролітрова РНК реверсували в кДНК за допомогою набору Multiscribe TM Reverse Transcriptase (Life Technologies, Thermo Fischer Scientific Inc.) відповідно до протоколу виробника. Детектор швидкої послідовності ABI 7500 був використаний для проведення кількісної RT-PCR. Дані були отримані як значення порогу циклу (Ct) та нормалізовані до гена домашнього господарства β-актину (∆Ct = Cttarget - Ctβ-актин). Для кожного гена аналізували дві проби, розраховували середнє значення Ct і використовували для аналізу. Розбіжності в експресії генів вираховували методом ΔΔCt, використовуючи мишей C57BL/6J, утримуваних на SFD як калібратор.

Опубліковано в Інтернеті:

Таблиця 2. Маркери, виявлені за допомогою qPCR, за допомогою аналізів експресії генів TaqMan.