Причинно-наслідковий зв’язок між гіперфібриногенемією та захворюваннями судин Американське товариство крові

  • Розділений екран
  • Поділитися піктограмою Поділіться
    • Facebook
    • Twitter
    • LinkedIn
    • Електронна пошта
  • Значок Інструменти Інструменти

    • Брайс Керлін, Брайан К. Кулі, Беренд Х. Ізерманн, Ірен Ернандес, Рашмі Суд, Марк Зогг, Сара Б. Хендріксон, Майкл В. Моссон, Сьюзен Лорд, Хартмут Вайлер; Причинно-наслідковий зв’язок між гіперфібриногенемією та судинними захворюваннями. Кров 2004; 103 (5): 1728–1734. doi: https://doi.org/10.1182/blood-2003-08-2886

      судин

      Завантажити файл цитування:

      Анотація

      Підвищений рівень фібриногену у плазмі крові пов’язаний із наявністю серцево-судинних захворювань, але суперечливо: чи підвищений фібриноген спричиняє підвищений ризик, і як такий є справжнім модифікатором серцево-судинних захворювань чи просто пов’язаний із захворюваннями. Досліджуючи трансгенну мишачу модель гіперфібриногенемії, ми показуємо, що підвищена концентрація фібриногену в плазмі крові (1) викликає посилене відкладення фібрину в конкретних органах, (2) взаємодіє з незалежним модифікатором гемостатичної активності для регулювання обміну/відкладення фібрину, (3) посилює неоінтимальну гіперплазія в експериментальній моделі ремоделювання судин, спричиненого стазом, проте (4) може пригнічувати утворення тромбіну у відповідь на виклик прокоагулянтів. Ці висновки дають прямі експериментальні докази того, що гіперфібриногенемія є більше, ніж побічним продуктом серцево-судинних захворювань, і може функціонувати незалежно або інтерактивно для модуляції тяжкості та/або прогресування судинних захворювань.

      Вступ

      Нещодавно описані генетично змінені миші з хронічно підвищеним рівнем фібриногену у плазмі крові за відсутності основного запалення забезпечують новий експериментальний інструмент для дослідження причинно-наслідкових зв'язків між гіперфібриногенемією та судинними захворюваннями. 18 Мутантний штам миші (надалі іменуваний мишами Hifib) був отриманий шляхом мікроін'єкції пронуклеарних ооцитів цілого локусу фібриногену миші, включаючи всі 3 ланцюги фібриногену, а також кілька кілобаз фланкуючої послідовності. Доданий трансгенний алель фібриногену успадковується менделівським способом, і, як повідомляється, миші демонструють приблизно 2-кратний підвищений рівень фібриногену в плазмі, проте не мають явних ознак захворювання та мають нормальну репродуктивну здатність. 18 Трансгензалежна гіперфібриногенемія не впливала на атерогенез, спричинений дієтою, у мишей C57Bl6 19 або у трансгенних мишей ApoE * 3-Leiden. 20

      Метою поточного дослідження було дослідити, чи викликає хронічно підвищений фібриноген у мишей Hifib (1) посилення внутрішньосудинного відкладення фібрину або змінений обмін фібрину (огену); (2) модифікує утворення тромбоцитів-тромбів у відповідь на гостре пошкодження ендотелію; (3) впливає на частоту або ступінь індукованого стазом тромбозу та ремоделювання судин; або (4) посилює тромбоз у мишей з основним станом гіперкоагуляції. До останньої мети було досягнуто схрещування мишей Hifib із генетично інженерним штамом миші, що несе мутацію (TMPro) у гені тромбомодуліну (TM), 21,22, для отримання мишей Hifib/TMPro. Мутація TMPro різко знижує кофакторну активність ТМ в залежній від тромбіну активації білка С і тим самим викликає стан гіперкоагуляції. Таким чином, аналіз мишей Hifib/TMPro дозволив нам дослідити наслідки гіперфібриногенемії у тварин, які виявили підвищену сприйнятливість до тромбозу.

      Матеріали і методи

      Трансгенні тварини

      Модель гострої травми сонної артерії

      Індуковане FeCl3 пошкодження артерій індукували згідно з опублікованими процедурами. 24,25 Ліву загальну сонну артерію оголили тупим розсіченням, і кровотік реєстрували за допомогою доплерівських зондів (модель 0,5 ВБ; Transonic Systems, Ітака, Нью-Йорк), розташованих навколо дистального кінця артерії. Через десять хвилин після розміщення зонда на адвентиціальну поверхню артерії на 1 хвилину наносили смужку фільтрувального паперу 1,0 × 0,6 мм, змочену 20% FeCl3. Поле промивали сольовим розчином і постійно контролювали потік. У деяких експериментах процедуру потім повторювали на правій загальній каротиді. Час оклюзії виражали як t75, час, коли амплітуда імпульсу падала до 25% від початкового потоку, визначається як середній потік, що виникає між хвилиною 2 і хвилиною 4 після травми. Дані оцінювали на предмет статистичної значущості за допомогою аналізу суми рангу Вількоксона та t-критерію Стьюдента.

      Перев’язка сонної артерії

      Ліву загальну сонну артерію розсікали, а кровотік постійно переривали, застосовуючи тугу лігатуру біля роздвоєння сонної артерії, як описано. 26 Через 4 тижні всіх тварин перфузували при фізіологічному тиску 4% параформальдегідом в 0,1 М фосфатному буфері натрію, рН 7,3. Ліву та праву загальні сонні артерії розтинали, вбудовували в парафін, а серійні зрізи (товщиною 5 мкм) вирізали з інтервалами 150 мкм по всій довжині судини. Оцифровані зображення цих судин аналізували за допомогою програмного забезпечення для аналізу зображень (NIH Image 1.60; National Institutes of Health, Bethesda, MD), як описано. 26

      Визначення рівня фібриногену в плазмі крові, комплексів тромбін-антитромбіну, D-димеру, відкладення фібрину в тканинах та генерації тромбіну in vitro

      Результати

      Метаболізм фібрину (огену) змінений у гіперфібриногенемічних мишей

      Рівні фібриногену у плазмі крові у мишей Hifib віком від 8 до 16 тижнів, визначені методом ІФА, були приблизно в 1,5 рази вищими, ніж у мишей дикого типу (3,5 ± 0,4 проти 2,4 ± 0,4 мг/мл ± SD; Р ≤ .0005; n = 12/група). Значення, отримані методом ІФА, корелювали з кількістю цілого згортається білка в бідній тромбоцитами плазмі. Рівні фібриногену у мишей TMPro- та Hifib/TMPro були такими ж, як і у мишей дикого типу та Hifib, демонструючи, що мутація TMPro не змінює рівні навколишнього фібриногену.

      Рівень плазмового продукту D-димеру з розщепленим фібрином був суттєво підвищений у мишей Hifib (рис. 1) порівняно з мишами дикого типу (40 ± 17 проти 7,9 ± 2 мкг/мл ± SD; P ≤ .0005), а також був вищим, ніж ті, що вимірювались у тварин TMPro (16,6 ± 6 мкг/мл ± SD, P ≤, 005). Відновлення зразків плазми мишей з дефіцитом фібриногену очищеним мишачим фібриногеном у концентраціях до 5 мг/мл не дало виявленого сигналу D-димеру. Подібним чином, збільшення нормальної плазми миші надлишком фібриногену для досягнення плазмової концентрації 5 мг/мл не змінило виміряну концентрацію D-димеру. Ці контрольні експерименти виключають можливість того, що приблизно 5-кратне підвищення D-димеру у мишей Hifib пояснюється перехресною реактивністю досліджуваних антитіл з мишачим фібриногеном. У Hifib/TMPro-мишей рівні D-димеру ще більше зросли (93 ± 40 мкг/мл ± SD). Це показує, що підвищення концентрації фібриногену в плазмі само спричиняло посилене утворення продуктів розпаду фібрину, а за висновком - посилене утворення фібрину. Цей ефект чітко спостерігається у мишей Hifib і є більш вираженим у тварин Hifib/TMPro, демонструючи, що обидві мутації взаємодіють у взаємодії щодо обміну фібрину (огену).