Прикордонна ідентифікація та характеристика антитіл людини, вироблених з жирових тканин

B Клітинна біологія

Редаговано
Дебора К. Данн-Уолтерс

Університет Суррея, Великобританія

Переглянуто
ТАКАШІ ХАШІМОТО

Вища медична школа, міський університет міста Осака, Японія

Марк Л. Ленг

Центр наук про здоров’я університету Оклахоми, США

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

ідентифікація

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 Кафедра мікробіології та імунології, Медичний факультет Університету Маямі, Маямі, Флорида, США
  • 2 Комплексний онкологічний центр Сильвестра, Університет Маямі, Школа медицини Міллера, Маямі, Флорида, США
  • 3 Центр інтегративної метаболоміки в Маямі (MIMRC), Університет Маямі, Школа медицини Міллера, Маямі, Флорида, США
  • 4 Відділ пластичної та реконструктивної хірургії, Кафедра хірургії, Університет Маямі, Школа медицини Міллера, Маямі, Флорида, США

Вступ

Ожиріння пов'язане зі зменшенням вироблення захисних антитіл (1, 2) та збільшенням вироблення аутоімунних антитіл у мишей (3) та людини (4). Ожиріння та пов'язане із цим запалення створюють оптимальне середовище для розвитку аутоімунних захворювань, оскільки це призводить до порушення механізмів анти-«самостійної» толерантності, що також погіршує прогресування захворювання. Результати, отримані на мишах, показали, що миші на дієті з високим вмістом жиру, порівняно з мишами на дієті з нормальним вмістом жиру, мають більш високий рівень білка теплового шоку 60 (HSP60), що пов'язано з більш високим рівнем Hsp60-специфічного IgG2c (аутоімунного ) антитіла (3). Результати, отримані у людей, показали, що плазма людей з ожирінням з інсулінорезистентністю (ІР) містить аутоантитіла, специфічні для внутрішньоклітинних білків, повсюдно експресуються в тканинах, включаючи підшлункову залозу, нервові тканини, м'язи або АТ, а також імунні клітини (4), що свідчить про вивільнення "само" антигенів в умовах ожиріння в тканинах-мішенях інсуліну. Більшість "само" антигенів - це клітинно-асоційовані білки (білки Гольджі та ендоплазматичного ретикулуму, РНК-полімераза, глутатіонтрансфераза, сигнальні білки) зі змінною експресією тканин.

Наскільки нам відомо, немає опублікованих даних, що свідчать про секрецію антитіл з аутоімунною специфічністю у людини із ожирінням АТ після місцевого вивільнення цих "само" антигенів. Нещодавно ми виявили декілька механізмів, відповідальних за вивільнення "само" антигенів в АТ із ожирінням людини, таких як гіпоксія, цитотоксичність NK-клітин та пошкодження ДНК, які індукують загибель клітин та подальше вивільнення прозапальних цитокінів. Ми також показали, що адипоцит-специфічні антитіла IgG секретуються в АТ із ожирінням людини і що клітини AT-B експресують мРНК для індукованої активацією цитидиндезамінази, ферменту рекомбінації перемикачів класу та соматичної гіпермутації, а також для фактора транскрипції Т -bet та мембранний маркер CD11c, обидва задіяні у виробництві аутоімунних антитіл IgG (5). У цій роботі ми охарактеризували "само" білки, які стимулювали секрецію аутоімунних антитіл у культурах імунних клітин, що походять від АТ. Більше того, ми показуємо, що адипоцити експресують молекули антиген-презентації CD1d і меншою мірою MHC класу II, і тому вони є хорошими антигенпрезентаційними клітинами в ожирінні АТ.

Матеріали і методи

Предмети

Експерименти проводились із використанням відкинутого підшкірного ожиріння АТ у жінок, які перенесли операцію з зменшення грудей у ​​відділі пластичної та реконструктивної хірургії лікарні Університету Маямі ( = 20, 25–55 років), Індекс маси тіла (ІМТ, кг/м 2) 31–39.

Особи, які брали участь у дослідженні, не хворіли і не вживали ліків, які, як відомо, змінюють імунну реакцію. Ми виключили суб’єктів із цукровим діабетом 2 типу, застійною серцевою недостатністю, серцево-судинними захворюваннями, хронічною нирковою недостатністю, злоякісними захворюваннями, захворюваннями нирок або печінки, аутоімунними захворюваннями, інфекційними захворюваннями, травмами чи хірургічними втручаннями, вагітністю або задокументованим зловживанням речовинами та/або алкоголем.

Учасники дослідження надали письмову інформовану згоду. Дослідження було розглянуто та схвалено науково-дослідним бюро Університету Маямі з протоколами IRB № 20070481 та # 20160542, що проводить огляд усіх досліджень людини, проведених під егідою Університету Маямі.

Самців мишей C57BL/6 купували у Національному інституті старіння та утримували в нашому сертифікованому AAALAC закладі. Мишей акліматизували щонайменше 7 днів перед жертвою. У цих дослідженнях не використовували мишей з ознаками захворювання. В експериментах, що використовуються в цьому документі, ми використовували 4 мишей із ожирінням середнього віку (12 місяців). Усі дослідження дотримувались принципів лабораторних рекомендацій з догляду за тваринами та були затверджені IACUC (протокол No 16-252).

Виділення імунних клітин з АТ

AT епідидимальної миші та AT підшкірної людини збирали у мишей із ожирінням та пацієнтів із ожирінням, які перенесли операції з зменшення грудей, відповідно зважували та промивали збалансованим сольовим розчином солі Хенкса (HBSS), як ми вже описали раніше (5, 6). Коротко АТ промивали, подрібнювали на дрібні шматочки, пропускали через 70 мкм фільтр і розщеплювали колагеназою типу I (SIGMA C-9263) протягом 1 год на водяній бані при 37 ° C. Перетравлені клітини пропускали через 300 мкм фільтр, центрифугували при 300 g для того, щоб відокремити плаваючі адипоцити від стромальної судинної фракції (SVF), що містить імунні клітини. Адипоцити представляють «плаваючу» фракцію АТ після перетравлення колагенази. Препарати адипоцитів не забруднені імунними клітинами. Потім SVF ресуспендували в ACK для лізису еритроцитів, промивали, підраховували і використовували для проточної цитометрії та в пробірці експерименти. SVF - це суміш мезенхімальних, ендотеліальних та імунних клітин. Імунна фракція SVF, виділена з АТ мишей із ожирінням та людини, містить макрофаги M1, Th1, Th17, Tγδ, продукуючі IFN-γ CD8 + Т-клітини, В-клітини та вроджені лімфоїдні клітини типу 1, усі вони сприяють секреції прозапальних цитокінів, хемокінів та адипокінів та до ІР.

Культури SVF

Після виділення клітини (2 × 10 6/мл) ресуспендували в повному середовищі (c-RPMI, RPMI 1640, доповнений 10% FCS, 10 мкг/мл Pen-Strep, 1 мМ пірувату натрію і 2 × 10 −5 M 2-ME та 2 mM L-глутамін). Культури залишали нестимульованими протягом 10 днів, потім супернатанти збирали та вимірювали методом ІФА на наявність адипоцитоспецифічного IgG.

Культури також були створені за відсутності макрофагів (MΦ), які були видалені пластичним зчепленням. Коротко кажучи, клітини (2 × 10 6/мл) ресуспендували в 1X PBS, інкубували протягом 3 год при 37 ° С в чашках Петрі (Falcon 3003), потім як не приклеєні клітини, так і MΦ підраховували гемоцитометром. Виснаження MΦ підтверджено проточною цитометрією.