Прикордонні пробіотичні властивості ентерококів, виділених із мікробіології кустарних молочних продуктів

Харчова мікробіологія

Ця стаття є частиною Теми дослідження

Безпека харчових продуктів та збудник харчових продуктів - глобальна перспектива різноманітності, боротьба з стійкістю до різних лікарських засобів та управління ними Переглянути всі 39 статей

Редаговано
Дізнайся-Хан Лі

Університет Монаш, Малайзія, Малайзія

Переглянуто
Серхіо Е. Пастеріс

Національний університет Тукумана, Аргентина

Костянтинос Пападімітріу

Департамент харчової науки та технологій, Пелопоннеський університет, Греція

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

прикордонні

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 Департамент харчових біотехнологій, відділення для північно-західного та західного регіону, Науково-дослідний інститут сільськогосподарських біотехнологій, Організація освіти та розвитку (AREEO), Тебріз, Іран
  • 2 БАД та Центр досліджень пробіотиків, Університет медичних наук Альборза, Карадж, Іран

Вступ

Ентерококи належать до родів молочнокислих бактерій (LAB). Вони є грампозитивними, каталазонегативними, коккоподібними, факультативними анаеробами та неспороутворюючими бактеріями (Haghshenas et al., 2016). На основі філогенетичних доказів та молекулярних досліджень (секвенування 16S-рДНК або гібридизація ДНК – ДНК) до цього роду було класифіковано понад 26 видів. Ці мікроорганізми є всюдисущими бактеріями, які є загальною мікробіотою в кишечнику людей, ссавців та інших тварин, шлунково-кишкових шляхах, але вони також є в грунті, воді, рослинних продуктах, м'ясі, ферментованому та вареному м'ясі та молочних продуктах (Li et al. ., 2018; Zommiti та ін., 2018). Це пов’язано з їх високою толерантністю до суворих умов, таких як високі температури, низький рН та висока солоність. Значна роль Росії E. faecium, E. faecalis, і E. durans у процесі дозрівання традиційних сирів показали, що ентерококи відіграють важливу роль у дозріванні цих сирів, ймовірно, шляхом протеолізу, ліполізу та розпаду цитратів, що сприяє їх типовому смаку та смаку. У більшості робіт це зазначено Ентерокок ізоляти відіграють життєво важливу роль у розвитку сенсорних властивостей ферментованих продуктів, таких як оливки (вони розщеплюють олевропеїн у ферментованих маслинах), ковбас та сиру (Морено та ін., 2006).

В основному існують різні масиви пробіотиків Лактобактерії і Біфідобактерії групи та Ентерокок останні роки використовуються у функціональних продуктах харчування (Haghshenas et al., 2017). Заявленими перевагами пробіотичних ентерококів є: (i) лікування діареї або діареї у поєднанні з антибіотикотерапією, вірусними забрудненнями, хіміотерапією та захворюваннями, що походять від харчових патогенів (Lau and Chamberlain, 2016); (ii) стримування росту патогенних бактерій (Zorriehzahra et al., 2016); (iii) антимутагенні та антиканцерогенні особливості; (iv); підвищений бар'єр слизової оболонки кишечника (Ahl et al., 2016); (v) стимуляція імунної системи (Sheikhi et al., 2016); (vi) профілактика виразок, пов'язаних з хелікобактер пілорі інфекція (Oh et al., 2016) та (vii) асиміляція холестерину в їжі та кишечнику людини (Kobyliak et al., 2016). Ці мікроорганізми мають антагоністичну активність через збудників різних антимікробних сполук. Виробництво включає бактеріоцини, молочну та оцтову кислоти та перекис водню.

Матеріали і методи

Відбір проб та умови культури

Кустарні молочні продукти (йогурти, сир та сир) збирали у вітчизняних виробників (табл. 1). Зразки транспортували до лабораторії в крижаних коробках і зберігали при 4 ° C. Для кращого відокремлення бактерій від твердих частинок йогурту та сиру первинна гомогенізація відбувалася за допомогою вихрового змішування. Для приготування бактеріальної суспензії йогурту 10 г йогурту переносили в 100 мл стерильної фізіологічної пептонової води і обережно струшували. Для приготування бактеріальної суспензії сиру та сиру 20 г кожної проби суспендували у 180 мл стерильного розчину тринатрію цитрату, а через півгодини 10 мл приготованого розчину додавали до 200 мл де Ман Рогоза Шарп (MRS). ) бульйон для збагачення та посилення початкової популяції бактерій в анаеробних умовах та інкубації при 37 ° C протягом 24 годин (Haghshenas et al., 2017).

Таблиця 1. Походження, регіон підготовлених зразків та переносимість ізолятів на кислоту та жовч.

Ізоляція Ентерокок Ізоляти

Ентерокок ізоляти виділяли методом смугастих пластин на агарі MRS та інкубували аеробно при 37 ° С протягом 24 годин. Поодинокі колонії регулярно перевіряли на чистоту мікроскопічним дослідженням. Чисті колонії використовувались для характеристики фарбування за Грамом та тесту на каталазу. Колонії, які були грампозитивними та каталазонегативними, відбирали та інокулювали у відвар MRS, що містить 30% гліцерину в якості кріопротектора, і зберігали при -80 ° C (El Soda et al., 2003). Очищені культури перед використанням активували шляхом подкультививання двічі у відварі MRS.

Оцінка властивостей пробіотиків

Толерантність до кислоти та жовчних солей

Для визначення кислотостійкості 10 мл бактеріальної культури кожного зразка інкубували протягом 24 годин у відварі MRS. Відібрані колонії переносили в мінеральний розчин, забуференний фосфатом, сольовий розчин (PBS, pH 2,5). Зразки інкубували аеробно протягом 3 год при 37 ° С. Потім клітини розбавляли до 10 разів за допомогою стерильного фізіологічного розчину (хлорид натрію: 5,8 г/л) і культивували кожне розведення 100 мкл для поверхні агару MRS у культуральному середовищі. Зразки інкубували аеробно протягом 48–72 год при 37 ° C (Haghshenas et al., 2015).

Толерантність до жовчних солей була проаналізована на основі методу, використовуваного раніше Намі та співавт. (2015b). Коротко, культуральне середовище для бульйону MRS, як контроль, та MRS з 0,3% жовчного оксигалу, що використовувались як тест-середовище (обробки), інокулювали одночасно 1% активної бактеріальної культури при 37 ° C протягом 4 годин. Оптичні щільності росту контрольних та оброблених культур вимірювали спектрофотометром (Еппендорф, Німеччина) при 600 нм. Відсоток придушення росту вимірювали за такою формулою:

Антимікробна активність та виявлення бактеріоцину

Для висновку та розпізнавання інгібуючих метаболітів, що виробляються, був проведений метод дифузійної свердловини Ентерокок ізоляти (Nami et al., 2015a). Культури відібраних ізолятів протягом ночі культивували в агарі MRS при 37 ° C протягом 24 годин. Індикаторними бактеріями, використаними в цьому дослідженні, були Shigella flexneri PTCC 1234, Золотистий стафілокок ATCC 25923, Listeria monocytogenes ATCC 13932, Yersinia enterocolitica ATCC 23715, Klebsiella pneumoniae PTCC 1053, кишкова паличка PTCC, 1276 та Bacillus subtilis ATCC 19652. Ці патогенні організми були придбані у колекції культури перських типів (PTCC) для виявлення антагоністичних речовин. Половину індикаторних бактерій McFarland (1,5 × 10 8 КУО/мл) виливали на агар Мюллера-Хінтона і лунки розрізали на тарілки. Потім кожну лунку заповнювали 50 мкл відфільтрованого надосадової рідини та планшети, витримані протягом ночі при температурі 37 ° C, і нарешті, зону гальмування навколо лунок вимірювали цифровими штангенциркулями.