Райдужна форель, генетично підібрана для збільшення вмісту жиру в м’язовій тканині, підвищеної активації

Unité Mixte de Recherches 1067 Nutrition Aquaculture and Génomique, Institut National de la Recherche Agronomique, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint Pée-sur-Nivelle, Франція

Адреса для запитів на передрук та іншої кореспонденції: S. Skiba-Cassy, UMR 1067 Nutrition, Aquaculture & Génomique, Institut National de la Recherche Agronomique, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint-Pée-sur-Nivelle, Франція (електронна пошта: [ захищений електронною поштою]).

Unité Mixte de Recherches 1067 Nutrition Aquaculture and Génomique, Institut National de la Recherche Agronomique, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint Pée-sur-Nivelle, Франція

Анотація

управління відкладенням жиру є значним викликом як для здоров'я людини, так і для розведення сільськогосподарських тварин. У людей ожиріння, виражене як надмірне розширення жирової тканини, часто асоціюється з розвитком метаболічних розладів, які стають дедалі поширенішими у всьому світі і, як прогнозується, значно зростуть протягом наступних 10 років (50). Управління відкладенням жиру у сільськогосподарських тварин, включаючи рибу, також стало надзвичайно важливим, особливо з точки зору якості м'яса, оскільки зберігання ліпідів у скелетних м'язах впливає на харчову цінність та сенсорні властивості м'яса (49).

Генетичний відбір часто застосовувався у сільськогосподарських тварин для управління вмістом жиру в організмі (7а, 24), але рідко застосовувався в аквакультурі. Нещодавно було розроблено дві експериментальні лінії райдужної форелі шляхом дивергентного відбору з низьким або високим вмістом жиру в м’язах із застосуванням неруйнівного методу вимірювання на живій рибі (36). Генетичний відбір високого вмісту жиру в м’язах не впливає на споживання корму, і подібний вміст жиру у всьому тілі було зафіксовано у двох лініях 80-грамової риби, яку годували однаковою дієтою (20). Метаболічна характеристика ліній змусила авторів припустити, що лінії представляють відмінності у використанні джерел енергії із зменшеним окисленням печінкової жирної кислоти та посиленим використанням глюкози як у печінці, так і в м'язах риб у жировій м'язовій лінії (FL) порівняно з м'яза лінія м'язів (LL) (20, 21). Оскільки інсулін контролює метаболізм глюкози та ліпідів, ми припустили, що шляхи інсуліну могли вплинути на генетичний відбір вмісту м'язового жиру.

Експериментальна процедура та процедура відбору проб.

Таблиця 1. Формула та аналітичний склад дієти

Рівні метаболітів у плазмі.

Рівні глюкози в плазмі, триацилгліцерину (TG) та вільних жирних кислот (FFA) вимірювали за допомогою глюкози RTU (BioMerieux, Marcy l'Etoile, Франція), PAP 150 (Biomérieux, Marcy-l'étoile, Франція) та наборів NEFA C (Wako Chemicals, Neuss, Німеччина) відповідно відповідно до рекомендацій кожного виробника.

Екстракція білка та Вестерн-блот.

Аналіз експресії генів: RT-PCR у реальному часі.

Загальні зразки РНК витягували із -80 ° C замороженої печінки риби, що голодувала, та риби, що перегорталася на 8 і 24 години, за допомогою реагенту Trizol (Invitrogen, Карлсбад, Каліфорнія) відповідно до рекомендацій виробника. Одна мікрограма отриманої загальної РНК була зворотно транскрибована в кДНК за допомогою набору SuperScript III RNaseH- зворотної транскриптази (Invitrogen) та випадкових праймерів (Promega, Charbonnières, Франція) відповідно до інструкцій кожного виробника. Рівні експресії цільових генів визначали за допомогою кількісної RT-PCR у реальному часі, використовуючи специфічні праймери ПЛР у реальному часі (табл. 2). Щоб уникнути ампліфікації геномної ДНК, пари праймерів включали один, що охоплює інтрон, олігонуклеотид, коли це можливо. Різні продукти ПЛР спочатку перевіряли шляхом секвенування, щоб підтвердити природу амплікона.

Таблиця 2. Послідовності праймерів

F, пряма грунтовка; R, зворотна грунтовка; nt, нуклеотиди. Приєднання до GenBank або приєднання Sigenae No. має такий вигляд: коефіцієнт подовження-1α (EF1α), AF498320; глюкокіназа (GK), AF135403; піруваткіназа (PK), AF246146; фосфоенолпіруваткарбоксикіназа (PEPCK), AF246149; глюкоза 6-фосфатаза 1 (G6Pase1), tcay0019b.d.18_3.1.s.om.8.1-1693; G6Pase2, AF120150; сериндегідратаза (SD), tcay0007b.b.13_3.1.s.om.8; синтаза жирних кислот (FAS), tcab0001c.e.06_5.1.s.om.8; АТФ-цитратна ліаза (ACLY), CA349411.1; глюкозо-6-фосфатдегідрогеназа (G6PDH), CA351434; карнітинпальмітоїлтрансфераза 1a (CPT1a), AF 327058; CPT1b, AF606076.

Ефективність ПЛР (Е) вимірювали як нахил стандартної кривої з використанням послідовного розведення кДНК, і всі значення були вище 1,9.