Рецептор NLRP3 сприяє захисту від експериментального антиген-опосередкованого холангіту

  • Розділений екран
  • Перегляд значок Перегляди
    • Зміст статті
    • Цифри та таблиці
    • Відео
    • Аудіо
    • Додаткові дані
  • Посилання PDF PDF
  • Поділитися піктограмою Поділіться
    • Facebook
    • Twitter
    • LinkedIn
    • Електронна пошта

  • Марісоль Ібет Гонсалес, Даніель Ваннан, Бертус Екстін, Хосе Луїс Рейєс; Рецептор NLRP3 сприяє захисту від експериментального антиген-опосередкованого холангіту. Biosci Rep 28 серпня 2020 р .; 40 (8): BSR20200689. doi: https://doi.org/10.1042/BSR20200689

    антиген-опосередкованого

    Завантажити файл цитування:

    Анотація

    Вступ

    Тут ми описуємо, що NLRP3 необхідний для обмеження імунопатогії, що спостерігається при експериментальному антиген-специфічному жовчному запальному захворюванні. У мишей, у яких відсутня запальна форма NLRP3, спостерігалося більш серйозне руйнування жовчних проток, яке посилювалось, коли мишей піддавали обезогенній дієті.

    Матеріали і методи

    Індукція мишей та холангіту

    Ми змоделювали гострий холангіт, використовуючи трохи модифікований протокол із моделі OVAbil [15], як повідомлялося раніше [16]. Експерименти на тваринах проводились в Інституті хронічних хвороб Снайдера (Університет Калгарі), а протокол дослідження M11025 був затверджений Комітетом з догляду за тваринами Університету Калгарі та відповідав Рекомендаціям по догляду та використанню лабораторних тварин. Коротко кажучи, мишей C57BL/6, що експресують фрагмент 139-285aa мембранно-зв’язаного білка овальбуміну (OVAbil), використовували як тварин-реципієнтів та порівнювали з мишами, які відповідали віку та статі, яким не було датчика NLRP3 (OVAbilxNLRP3 -/-). Обидві групи годувались або стандартною чау (SC), або дієтою з високим вмістом жиру (HFD) протягом 12 тижнів, як описано раніше [16]. Миші, що годували SC та HFD, отримували 1 × 10 7 лімфоцитів селезінки, отримані від OVA-трансгенних мишей I та II (OTI та OTII), шляхом інтраперитонеальних (ip.) Ін’єкцій.

    Гістологія

    Через десять днів після перенесення клітин OTI та OTII (індукція холангіту) мишей по-людськи вбивали під глибокою інгаляційною анестезією (ізофлуран) з подальшим вивихом шийки матки та збиранням зразків печінки. Тканину вкладали у парафін та розділяли (товщиною 5 мкМ) перед фарбуванням H&E для гістопатологічного аналізу. Під світловим мікроскопом для архітектури жовчних проток було оцінено 5 випадкових портальних шляхів, обраних випадковим чином: 0; жовчний проток добре збережений, 1; невпорядкований жовчний проток 2; інфільтруючі клітини, що витісняють холангіоцити, 3; жовчна протока відсутня. Для оцінки запалення 0; відсутні інфільтруючі клітини, 1; помірні інфільтруючі клітини, 2; масивні запальні клітини лише в портальних шляхах 3; масивні запальні клітини, включаючи паренхіму печінки.

    Проточна цитометрія

    Після жертвоприношення печінку експериментальних груп отримували та гомогенізували у FBS, що містить PBS, за допомогою тканинного дисоціатора softMACS (Miltenyi Biotec Inc, Німеччина). Зразки шарували на 33/77% градієнтів перколлу (Percoll, GE Healthcare Bio-Sciences AB, Уппсала, Швеція) і центрифугували протягом 20 хв при 200 g, при кімнатній температурі для досягнення поділу клітин. Суспензії клітин, вилучені з градієнтів, регулювали (1 × 10 6/мл) і фарбували в проточному цитометричному буфері (5% FBS, 5 мМ EDTA та 0,1% азиду натрію). Фарбування проводили з використанням таких кон'югованих фторхромом антитіл: PO-CD11b, PECy7-F4/80, APC-Cy7-Ly6C та PE-Ly6G. Дані отримували на проточному цитометрі Aria II (BD Biosciences) та аналізували за допомогою програмного забезпечення Kaluza (Beckman Coulter, США).

    Тести на сироватку крові

    Цільну кров відбирали шляхом серцевої пункції у мишей під глибокою анестезією при жертвоприношенні (ізофлуран, продукти, що містять галоген). Зразки крові центрифугували, а сироватки з експериментальних груп тестували на рівень аланінамінотрансферази (ALT) лабораторіями Calgary Laboratory (Калгарі, АБ, Канада) та розчинними імунними медіаторами з аналізом мишачого цитокіну 31-plex Discovery Assay (Eve Technologies, Calgary, AB, Канада), як повідомляється [16]. Концентрації цитокінів та хемокінів показані у пг/мл.