Видалення антитіл з еритроцитів Порівняння трьох методів елюції
Рахул Катарія
Кафедра трансфузійної медицини, Інститут медичних наук Санджай Ганді, Лакхнау, штат Уттар-Прадеш, Індія
Раджендра К. Чаудхарі
Кафедра трансфузійної медицини, Інститут медичних наук Санджай Ганді, Лакхнау, штат Уттар-Прадеш, Індія
Анотація
Передумови:
Прямий антиглобуліновий тест (DAT) - найпоширеніший тест, проведений в лабораторії імуногематології, який виявляє імуноглобулін та фрагменти комплементу, прикріплені до еритроцитів. Ці покриті еритроцитами важко точно визначити фенотип, що може знадобитися для відбору відповідної одиниці еритроцитів для переливання.
Ми вивчали ефективність різних методів елюції для видалення антитіл, що покривають червоні клітини, та їх вплив на антигенну активність різних груп крові.
Матеріали і методи:
До дослідження були включені зразки пацієнтів, направлені на серологічну оцінку аутоімунного гемолізу. DAT та непрямий антиглобуліновий тест (IAT) проводили за допомогою гелевих карток (система ID, DiaMed Швейцарія). Еритроцити, покриті антитілами, або сенсибілізацією in vivo, або in vitro, використовували для оцінки результатів трьох методів елюції.
Результати:
З 93 DAT-позитивних зразків, вже сенсибілізованих in vivo, 28 (30%) зразків стали DAT-негативними після елюції за допомогою будь-якого з трьох методів, тоді як 36 (38,8%) показали зниження сили реакції, тоді як у 29 (31,2%) спостерігалося відсутність зміни сили реакції. Подібним чином із 17 зразків, підготовлених сенсибілізацією in vitro, 12 зразків стали повністю негативними після елюції гліцин-HCl/EDTA, 9 та 5 зразків стали негативними після елюювання методом теплового елюювання та хлорохіндифосфату відповідно.
Висновок:
При порівняльному аналізі метод елюції гліцин-HCl/EDTA був кращим за інші два методи і може бути використаний для елюювання імуноглобулінів з інтактних еритроцитів.
Вступ
Прямий антиглобуліновий тест (DAT) - найпоширеніший тест, проведений в лабораторії імуногематології, який виявляє імуноглобулін та фрагменти комплементу, прикріплені до еритроцитів. Зазвичай його проводять для оцінки пацієнтів із підозрою на гемоліз, а позитивний результат означає in vivo покриття еритроцитів. Еритроцити можуть бути вкриті IgG або комплементом окремо або в комбінації. [1] Ці покриті еритроцитами важко точно визначити фенотип, що може знадобитися для відбору відповідної одиниці крові для переливання у цих пацієнтів. [2]
Для деяких антигенів червоних клітин доступні фізіологічно активні антисироватки, хімічно модифіковані антисиворотки та моноклональні антитіла IgM; антигени, виявлені за допомогою непрямого антиглобулінового тесту, важко піддаються фенотипу. [3] Тому необхідно видаляти антитіла з сенсибілізованих еритроцитів in vivo, щоб фенотипувати їх. Для дисоціації антитіл з еритроцитами застосовують різні процедури елюції. Багато процедур елюції або спричиняють тотальний гемоліз червоних клітин, як це спостерігається при застосуванні ефіру хлороформу або ксилолу, або викликають денатурацію Келла; Антигени Даффі та системи МНС, як це спостерігається при застосуванні ZZAP (дитиотреїтол та папаїн). [4,5]
Ми вивчали ефективність різних методів елюції для видалення антитіл, що покривають еритроцити, та їх вплив на антигенну активність різних груп крові.
Матеріали і методи
До дослідження були включені зразки пацієнтів, направлені на серологічну оцінку аутоімунного гемолізу. DAT та IAT проводили за допомогою гелевих карток (система ID, DiaMed Швейцарія). Еритроцити, покриті антитілами, або сенсибілізацією in vivo, або in vitro, використовували для оцінки результатів трьох методів елюції.
Методи елюції гліцин-HCl/EDTA, теплового елюювання та хлорохіндифосфату проводили на всіх позитивних зразках DAT та порівнювали їх ефективність при видаленні аутоантитіл.