Відчуття болю в животі, спричиненого перитонеальним карциноматозом, супроводжується змінами в
Масамі Сузукі, Мінору Наріта, Мінамі Хасегава, Садайосі Фурута, Томоюкі Кавамата, Махо Асікава, Канако Міяно, Казуйосі Янагіхара, Фуміко Чівакі, Такахіро Очія, Цутому Сузукі, Мотохіро Матоба, Іроасуо Сасакі; Відчуття болю в животі, спричиненого перитонеальним карциноматозом, супроводжується змінами в експресії речовини Р та µ-опіоїдних рецепторів у спинному мозку мишей. Анестезіологія 2012; 117: 847–856 doi: https://doi.org/10.1097/ALN.0b013e31826a4ac8
Завантажити файл цитування:
Пацієнти з перитонеальним карциноматозом часто відзначають біль у животі, який є відносно рефрактерним до морфіну. Вважається, що для дослідження механізму болю в животі для розробки оптимальних методів лікування цього типу болю потрібна нова тваринна модель.
Щоб підготувати модель перитонеального карциноматозу, в черевну порожнину імплантували ракові клітини шлунка, що засівають перитонеально, 60As6. Ноцицептивну модальність поведінки, пов’язаної з болем, оцінювали з точки зору абстинентної поведінки у відповідь на механічні подразники та поведінку згорблень. Зразки тканин гангліїв спинного кореня миші та спинного мозку піддавались імуногістохімії та ланцюговій реакції полімеразної зворотної транскрипції в режимі реального часу.
Миші з перитонеальною дисемінацією продемонстрували значну гіперчутливість живота до механічної стимуляції та спонтанної поведінки вісцерального болю. Відмічено значне збільшення c-Fos-позитивних клітин у спинному мозку у мишей, що несуть пухлину. Ці миші демонстрували значне збільшення речовини Р-позитивних нейронів у донгсальних кореневих гангліях (контроль проти пухлини, 15,4 ± 1,1 проти 24,2 ± 3,6, Р
Як регуляція речовини Р, так і зниження регуляції μ-опіоїдного рецептора, що спостерігається в гангліях дорсального кореня, можуть, принаймні частково, бути відповідальними за болі в животі, пов'язані з перитонеальним карциноматозом.
Що ми вже знаємо про цю тему
У деяких хворих на рак пухлина поширюється по черевній очеревині
Хвороба широко поширених пухлин очеревини, карциноматоз, може бути болючою та стійкою до звичайних знеболюючих методів лікування
Що ця стаття розповідає нам про нове
Слідчі розробили мишачу модель карциноматозу
Дослідження поведінки вказують на наявність реакцій, пов’язаних з болем, і, як і у пацієнтів, реакції стійкі до морфію
Надалі експериментальну терапію болю можна вивчати
ПОмірний або сильний біль, пов'язаний з раком, може суттєво погіршити якість життя та виживання пацієнтів і вражає 64% пацієнтів з метастатичним або запущеним раком.1 Сприйнята інтенсивність цього болю залежить від конкретного типу раку та його локалізації, а також чутливість кожного пацієнта до болю. Біль, асоційована з раком, як правило, лікується опіоїдами, нестероїдними протизапальними препаратами, кортикостероїдами, місцевими анестетиками, антидепресантами та протисудомними засобами, як окремо, так і в поєднанні. 3,4 Незважаючи на доступність цих різних лікарських засобів лікування, у деяких пацієнтів із термінальним раком може бути важко контролювати біль. Відповідно, потрібні більш ефективні методи лікування. Наше погане розуміння механізму болю, пов'язаного з раком, продовжує залишатися основною перешкодою для відкриття нових анальгетиків для вирішення цієї потреби.
Матеріали і методи
Всі експерименти проводились відповідно до етичних вказівок Міжнародної асоціації з вивчення болю15 та були затверджені Комітетом з етики експериментів на тваринах Національного центру раку (Цукідзі, Токіо, Японія). В експериментах було докладено зусиль, щоб мінімізувати кількість використаних тварин та їх страждання.
Тварини
Були використані самці мишей C.B17/Icr-scid та миші Інституту ракових захворювань вагою 22-25 г. Мишей купували у компанії CLEA Japan (Токіо, Японія) і містили їх при кімнатній температурі 23 ± 1 ° C з 12-годинним циклом світло-темрява. Мишей утримували в конкретних умовах, вільних від патогенів, і забезпечували стерильним кормом, водою та клітинами.
Клітинні лінії та культура
Клітинна лінія клітин раку шлунка людини, HSC60, була встановлена, як описано раніше. 16 Сильно перитонеально засіваюча клітинна лінія, 60As6 була встановлена з HSC60 шляхом ортотопічної імплантації тканин мишам scid. стіна scid миші. Протягом шести ітерацій ми збирали клітини асцитичної пухлини та проводили ортотопічне посівання цих клітин мишам для встановлення високометастатичної клітинної лінії 60As6. Цю клітинну лінію підтримували в середовищі RPMI1640, доповненій фетальною телячою сироваткою (10%), 100 ОД/мл натрію пеніциліну G та 100 мкг/мл сульфату стрептоміцину в атмосфері 5% вуглекислого газу та 95% повітря при 37 ° C. Для встановлення трансфектантів, що експресують ген люциферази, використовували плазмідні вектори, що несуть ген люциферази світлячка, які називали pLuc/Neo, та реагент для трансфекції, LipofectAMINE 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA), як рекомендовано виробником. Для відбору стабільних трансфектантів використовували генетицин (500 мкг/мл; Invitrogen), а трансфіковані клони перевіряли на експресію гена люциферази шляхом виявлення біолюмінесценції за допомогою системи IVIS (Xenogen, Alameda, CA). Клони, які експресували ген люциферази, називались клітинами 60As6Luc.
Внутрішньочеревна інокуляція клітин 60As6Luc
Щільність клітин 60As6Luc була відрегульована до 1 × 10 6 клітин на 1 мл сольового розчину, забуференного фосфатом (PBS). В експериментальній групі суспензію клітин вводили в черевну порожнину через голку калібру 26,5, введену в центральну область живота. У контрольній групі PBS вводили в черевну порожнину замість клітин 60As6Luc.
Вимірювання росту пухлини за допомогою візуалізації люциферази
Для вимірювання росту пухлини використовували візуалізацію люциферази всього тіла за допомогою системи візуалізації IVIS для візуалізації клітин 60As6Luc протягом 10-хвилинного часу інтеграції для отримання зображення, як описано раніше. 18 Коротко, мишам вводили внутрішньочеревно 15 мг D-люциферину калієвої солі в 1 мл PBS за допомогою шприца 26,5 калібру. Потім їх знеболювали ізофлураном. Відносне навантаження на метастази пухлини визначали за допомогою програмного забезпечення Living Image (версія 2.50, Xenogen).