Вплив метаболізму палива у канадських гусей на глюкагон на кінетику глюкози
Департамент біології, Університет Оттави, Оттава, Онтаріо, Канада
Адреса для запитів на передрук та іншої кореспонденції: Е. Вайянкур, департамент біології, Університет. з Оттави, 30 Марі-Кюрі, Оттава, Онтаріо, K1N 6N5, Канада (електронна пошта: [електронна пошта захищена]).
Департамент біології, Університет Оттави, Оттава, Онтаріо, Канада
Анотація
Тварини.
Катетеризації.
Непряма калориметрія.
Їжу затримували протягом 8 годин перед початком вимірювань, щоб отримати надійні вимірювання швидкості метаболізму на початковому рівні (шляхом видалення приросту тепла під час годування) та полегшити очищення післяекспериментального обладнання (2). Потім вимірювали норми споживання кисню (ṀO2) та вироблення діоксиду вуглецю (ṀCO2) за допомогою відкаліброваної системи Oxymax (Columbus Instruments, Columbus, OH) (докладніше див. Посилання 52), підключеної до виготовленого на замовлення подвійного респірометра Lexan подається повітря з температурою 20 ° C зі швидкістю 8–12 л/хв. Попередні експерименти показали, що гуси залишаються тихішими, стоячи на злегка охолодженій поверхні. Тому знімне дно респірометра було видалено, щоб птахи могли стояти безпосередньо на спеціально виготовленій, 60 × 60-сантиметровій терморегульованій алюмінієвій пластині, витриманій при 15 ° C за допомогою водяної бані. Заміна плоского дна Лексана плоскою алюмінієвою пластиною не змінила гучності респірометра і не вплинула на його роботу.
Кінетика глюкози.
Відбір проб тканин.
Дев'ять додаткових відбитків дорослих канадських гусей (чотири самці та п'ять самок) були знеболені на фермі в грудні 2012 р. За допомогою внутрішньом'язової ін'єкції кетаміну та ксилазину та, під час знеболення, були евтаназовані при передозуванні внутрішньоочеревинно введеного пентобарбіталу натрію. Приблизно 5 г тканини швидко висікали і затискали заморожуванням за допомогою алюмінієвих щипців, попередньо охолоджених у рідкому азоті. Зразки грудної клітки брали вздовж передньої частини кіля, по всій товщині м’яза. Усі тканини відбирали і заморожували протягом 10 хв після смерті. Потім грудну клітку та печінку видаляли з туш, поміщали у мічені поліетиленові пакети та доставляли назад у лабораторію, де реєстрували масу органів (включаючи заморожені зразки) для обох тканин для розрахунку запасів вуглеводів. Зразки зберігали при -80 ° C до аналізу концентрації вуглеводів. Для аналізу крихкі заморожені зразки грудної клітки розбивали на дрібні шматочки і відбирали випадковим чином, тим самим дозволяючи проводити вимірювання, репрезентативні для всієї товщини м'яза.
Концентрація глюкози та глікогену.
Процедури вимірювання концентрації глюкози та глікогену в тканинах були адаптовані від Фурньє та Вебера (14). Коротко, ~ 1 г тканини (грудна клітка, печінка) тонко подрібнювали в рідкому азоті за допомогою попередньо охолодженого ступки. Кожен заморожений зразок зважували і поміщали в 4 обсяги крижаної 6% хлорної кислоти (PCA). Після гомогенізації зразки центрифугували при 2800 g протягом 10 хв. Потім супернатанти розподіляли в 1,5 мл пробірки для центрифуги і зберігали при -20 ° C до аналізу. Концентрацію глюкози визначали за Бергмаєром (4). Концентрацію глікогену визначали за допомогою амілоглюкозидази (A-7095; Sigma-Aldrich, Сент-Луїс, Міссурі) для гідролізу глікогену з подальшим додаванням 6% PCA для зупинки реакції. У кожній серії аналізів використовувались стандарти глюкози та глікогену та негативний контроль, оскільки амілоглюкозидаза містила значну кількість глюкози та/або глікогену. Концентрації глікогену в тканинах коригували на цей внесок забрудненим ферментом та на вільну глюкозу, яка вже була до гідролізу глікогену.
Аналіз плазми.
Розрахунки та статистика.
Рис. 1.Неестерифікована жирна кислота плазми (A), фосфоліпід (A), триацилгліцерин (A), гліцерин (), глюкоза (), і лактат () концентрація у дорослих канадських гусей до, під час та після інфузії глюкагону. * Значна різниця від базового рівня (
Таблиця 1. Відносний внесок (масових відсотків) окремих жирних кислот у загальний обсяг нестерифікованих жирних кислот, триацилгліцерину та фосфоліпідів у плазмі канадських гусей
Значення - це масові відсотки метилових ефірів жирних кислот, виражені як середні значення ± SE ( = 5). NEFA, нестерифіковані жирні кислоти; ТАГ, триацилгліцерин; PL, фосфоліпіди; SFA, насичені жирні кислоти; MUFA, мононенасичені жирні кислоти; PUFA, поліненасичені жирні кислоти; DBI, індекс подвійних зв’язків; н.д., не виявлено; t.a., слідові суми. Табулюються лише жирні кислоти, що становлять> 1% від загальної концентрації жирних кислот принаймні в одній фракції. Для кожної фракції також вказуються загальна концентрація (у мікромолях FA на мілілітр плазми), відносний внесок SFA, MUFA та PUFA, DBI та середня довжина вуглецевого ланцюга. Відносна кількість окремих жирних кислот у кожній ліпідній фракції не змінювалася при вливанні глюкагону; таким чином, тут представлені середні значення для всього експерименту.