АДІПОЦИТ (ПРО) РЕНІН-РЕЦЕПТОР НЕДОСТУПАЄ ІНДИКУЄ ЛІПОДИСТРОФІЮ, СТЕАТОЗ ПЕЧІНИ І ЗБІЛЬШУЄ КРОВ
Чіа-Хуа Ву
1 Відділ фармакології та харчових наук Університету Кентуккі, Лексінгтон, штат Кентуккі
Шаян Мохаммадмораді
1 Кафедра фармакології та харчових наук Університету Кентуккі, Лексінгтон, штат Кентуккі
Джоел Томпсон
2 Відділ ендокринології та молекулярної медицини, Університет Кентуккі, Лексінгтон, Кентуккі
Вень Су
3 Кафедра фізіології Університету Кентуккі, Лексингтон, штат Кентуккі
Мін Гун
3 Кафедра фізіології Університету Кентуккі, Лексингтон, штат Кентуккі
Женев'єва Нгуєн
4 Національний інститут сантехніки та медичного дослідження (INSERM) та Коледж Франції, відділ експериментальної медицини, Париж, Франція
Фредеріке Яннікуріс
1 Відділ фармакології та харчових наук Університету Кентуккі, Лексінгтон, штат Кентуккі
Пов’язані дані
Анотація
Гіпертонія є основною причиною серцево-судинних захворювань у всьому світі, і, згідно з NHANES III, поширеність гіпертонії продовжує зростати. 1,2 Ожиріння є важливим фактором ризику гіпертонії. 1 Система ренін-ангіотензину (RAS) визнана надзвичайно важливою для регулювання артеріального тиску та гомеостазу натрію та води. Видалення компонентів RAS, наприклад, ангіотензиногену (AGT) у печінці або жировій тканині, запобігає гіпертонії, пов’язаній з ожирінням. 3,4
Методи та тварини
Усі процедури із залученням тварин проводились згідно з Національним керівництвом інститутів охорони здоров’я щодо догляду та використання лабораторних тварин і були схвалені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин при Університеті Кентуккі (номер протоколу IACUC Університету Кентуккі: 2013-1109 ). Самки мишей з сайтами loxP, що фланкують екзон 2 гена PRR (PRR fl/fl), були виведені до трансгенних самців мишей (PRR fl/Y), що експресують Cre рекомбіназу під контролем промотору адипонектину (назва штаму: B6; FVB-Tg ( Adipoq-cre) 1Evdr/JB6; FVB-Tg (Adipoq-cre) 1Evdr/J) 24 (Рисунок 1A). Дієти, вимірювання плазми, гістологія, радіотелеметрія та статистичний аналіз описані в Інтернет-додатку до даних.
(A) Схематичне зображення алелю PRR, фланкированного loxP, до (a) та після рекомбінації з експресією Cre, керованою адипонектином (b). (B) РНК PRR мРНК достаток диференційованих адипоцитів із підшкірної жирової тканини мишей PRR fl/Y та PRR Adi/Y. Дані є середнім ± SEM для 3-6 мишей. * P fl/Y миші.
Статистичний аналіз
Результати виражаються як середнє значення ± SEM. Всі дані були проаналізовані за допомогою Sigma Plot та Graph Prism. ANOVA (та повторні заходи ANOVA, коли це доречно) використовувались для порівняння дієти та ефекту генотипу, після чого проводились пост-hoc тести з використанням корекцій Holm-Sidak або Bonferroni для множинних порівнянь. Коли припущення, що лежать в основі ANOVA, не виконувалися інакше, дані трансформувались нелінійно; однак для зручності ілюстрації на малюнках зображені нетрансформовані дані. GraphPad QuickCalcs (тест Груббса) використовували для визначення статистичних відхилень, а t-тест використовували для порівняння середнього рівня інсуліну між HF та LF мишами. Статистичну значимість визначали як P fl/Y), а мишей з дефіцитом адипоцитів-PRR (PRR Adi/Y) диференціювали на адипоцити (рис. 1А). Чисельність PRR мРНК помітно знизилася в адипоцитах, диференційованих від мишей PRR Adi/Y, порівняно з контрольними мишами PRR fl/Y (Рисунок 1B; P Фігура 2A) без суттєвої різниці між генотипами. Маса жиру була значно зменшена у PRR Adi/Y у порівнянні з контрольними мишами PRR fl/Y (рис. 2B) і не збільшувалася з віком у мишей PRR Adi/Y, що припускає, що миші PRR Adi/Y не накопичують жирової тканини (рис. S1) . Маса всіх білих жирових тканин була значно зменшена у мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y (таблиця S1, миші P fl/Y виявили наявність диференційованих адипоцитів у всьому розрізі, тоді як гістологічний аналіз залишкової жирової тканини з навколо епідидиму PRR Миші Adi/Y показали несподівано дуже малу кількість диференційованих адипоцитів (рис. S2) .Щоб визначити, чи був адипоцит PRR залучений до диференціації адипоцитів, PRR замовчувався in vitro в клітинах 3T3-L1 (рис. S3). Оцінювали PPARγ, важливий ген, що бере участь у диференціації адипоцитів, і білок, що зв’язує жирні кислоти 4 (Fabp4 або aP2), маркер для диференційованих адипоцитів і білок-носій для жирних кислот. Рівень мРНК PPARγ та Fabp4 значно зменшився у диференційовані клітини siPRR порівняно з контрольними клітинами.
Дефіцит PRR адипоцитів зменшує жирову масу у мишей, які харчуються стандартною дієтою. (A) Криві маси тіла мишей PRR fl/Y та PRR Adi/Y. Дані є середніми ± SEM 4-6 мишей. (B) Жирова маса (% від маси тіла) для мишей у кожній групі. Дані є середніми ± SEM 4-6 мишей. * P fl/Y .
Вага тканин печінки, селезінки та підшлункової залози був значно вищим у мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y (таблиця S1). Концентрації лептину у плазмі крові були меншими у мишей PRR Adi/Y, ніж у мишей PRR fl/Y (таблиця S1). Толерантність до глюкози не відрізнялася між генотипами на 5, 9 або 13 тижні експерименту (рис. S4).
Специфічний для адипоцитів дефіцит PRR викликав накопичення ліпідів у печінці самців мишей, яких годували стандартною дієтою
Мікроскопічне дослідження зрізів печінки виявило збільшення накопичення печінкового жиру, що включає малі та великі жирові вакуолі у мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y (рис. S5). Нейтральні ліпіди значно підвищувались у печінці мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y. Тригліцериди плазми суттєво не відрізнялися між групами (таблиця S1).
Специфічний для адипоцитів дефіцит PRR підвищував систолічний артеріальний тиск у самців мишей, які харчувались стандартною дієтою
SBP та пульсовий тиск були значно вищими у мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y (рис. 3). Середній артеріальний артеріальний тиск, діастолічний артеріальний тиск та частота серцевих скорочень суттєво не відрізнялись між групами (Таблиця S2).
Дефіцит PRR адипоцитів підвищував систолічний артеріальний тиск (SBP; 24 год) у мишей, які годувались стандартною дієтою. (A) SBP (24 год) для самців PRR fl/Y та PRR Adi/Y мишей. Дані є середніми ± SEM 4 мишей. * P fl/Y миші.
Специфічний для адипоцитів дефіцит PRR збільшує концентрацію sPRR у плазмі крові
Специфічний для адипоцитів дефіцит PRR не змінює концентрацію АГТ у плазмі крові (рис. 4А). Активність реніну в плазмі (PRA) та концентрація реніну в плазмі крові (PRC) не суттєво відрізнялися між мишами PRR Adi/Y та мишами PRR fl/Y (рис. 4B), що свідчить про те, що специфічний для адипоцитів дефіцит PRR не впливав на AGT, PRA або PRC . Дивно, але рівень sPRR у плазмі збільшився у три рази у мишей PRR Adi/Y порівняно з мишами PRR fl/Y (рис. 4C).