Антагоніст гормону, що вивільняє гормон росту, MZ-5-156 пригнічує ріст DU-145 людини

Внесок Ендрю В. Шаллі

гормон

Анотація

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Пептид та реагенти.

Антагоніст GH-RH (MZ-5-156) PhAc- [D-Arg 2, Phe (p-Cl) 6, Abu 15, Nle 27] hGH-RH (1–28) Agm [де PhAc - це фенілацетил, Phe ( p-Cl) - парахлор-фенілаланіл, Abu - α-аміноізобутирил, Nle - норлейцил, а Agm - агматин] синтезований твердофазними методами та очищений у нашій лабораторії (20). Для щоденних ін’єкцій MZ-5-156 розчиняли в 0,1% диметилсульфоксиді (DMSO) у стерильному 10% розчині пропіленгліколь/сольовий розчин (Sigma).

Тварини.

Оголених мишей атимічного типу (Ncr nu/nu), віком приблизно 6 тижнів після прибуття, взяли з Національного інституту раку (Бетесда, штат Меріленд) і розмістили в шарах ламінарного потоку повітря в умовах без патогенів при 12-годинному освітленні h темний графік і подається в автоклаві стандартна чау і вода за бажанням. Догляд за ними відповідав інституційним правилам.

Культура клітин.

Лінія раку передміхурової залози DU-145, яка не залежить від андрогену, була отримана з американської колекції типів культур (ATCC, Манассас, штат Вірджинія). Клітини DU-145 вирощували як моношар у середовищі RPMI 1640 (GIBCO), доповненому 10% фетальною бичачою сироваткою, антибіотиками та антимікотиками при температурі 37 ° C у зволоженому атмосфері 95% повітря/5% CO2. Клітини пухлини, що ростуть експоненціально, збирали шляхом короткої інкубації з 0,25% розчином трипсину-ЕДТА (GIBCO). Ксенотрансплантати DU-145 були ініційовані s.c. ін'єкція 1 × 10 7 клітин у ліві боки п’яти голих мишей-самців.

Експериментальний протокол.

Пухлини DU-145, отримані через 8 тижнів росту, були асептично розсічені та механічно подрібнені; 3-міліметрові 3 шматочки кожної пухлинної тканини пересаджували s.c. голкою троакара у самців оголених мишей під наркозом метоксифлуран (Метофан, Пітман – Мур, Манделейн, Іллінойс). Через шість тижнів після трансплантації, коли пухлини виросли до об'єму від 40 до 50 мм 3, мишей, що несуть пухлину, розділили на дві групи по вісім тварин у кожній. Контрольній групі вводили лише 0,1% ДМСО у 10% пропіленгліколь/сольовий розчин. (розчин носія), а експериментальну групу обробляли 20 мкг антагоніста GH-RH MZ-5-156 с. с. два рази на день. Лікування продовжували протягом 8 тижнів. Пухлини вимірювали один раз на тиждень мікрокаліперами, і обсяг пухлини обчислювали як довжину × ширину × висоту × 0,5236 (25). В кінці експерименту мишам знеболювали метоксифлюраном і жертвували декапітацією, а також збирали кров стовбура. Сироватку відокремлювали та аналізували радіоімуноаналізом. Реєстрували масу тіла, пухлини ретельно розтинали, очищали та зважували, а зразки кожної пухлини відбирали для радіоімунологічного та молекулярно-біологічного аналізів.