Антиатеросклеротична ефективність олмесартану Журнал гіпертонії людини

Анотація

Вступ

Для з'ясування антиатеросклеротичного механізму антагоніста AT1-рецепторів у приматів ми дослідили, чи впливає антагоніст AT1-рецептора, олмесартан, на функцію ендотелію та сироваткові маркери запалення та фактори росту у мавп, яких годували дієтою з високим вмістом холестерину.

Методи

Експериментальний протокол

Мавпи (Macaca fascicularis, n = 18) обох статей були придбані у компанії Keari Co (Осака, Японія). Вага тіла цих мавп коливався від 4,3 до 6,2 кг. Усі мавпи утримувались при кімнатній температурі (23–26 ° C) з 12-годинним циклом світло-темрява і мали вільний доступ до їжі та води. Шість мавп годувались нормальним харчуванням протягом 6 місяців (група з нормальним харчуванням). Дванадцять мавп, яких годували дієтою з високим рівнем холестерину протягом 6 місяців, були порівну розділені на контрольну групу з високим рівнем холестерину та групу, якій давали олмесартан медоксоміл (10 мг/кг/добу, перорально). Дієта з високим вмістом холестерину, яка містила 4% холестерину та 6% кукурудзяної олії, та звичайна дієта були придбані у Oriental Yeast Co (Osaka).

На початковому етапі та через 1 місяць, 3 місяці та 6 місяців систолічний АТ (SBP) та частоту серцевих скорочень контролювали безпосередньо за допомогою катетера (Suflo) (Термо, Токіо, Японія) з датчиком у мавп під наркозом кетаміну гідрохлоридом (10 мг/кг внутрішньом’язово). Зразки крові відбирали для вимірювання рівня ліпідів на початковому рівні та через 2 місяці, 4 місяці та 6 місяців. Наприкінці 6-місячного періоду лікування мавп знеболювали кетаміном гідрохлоридом (10 мг/кг внутрішньом’язово) і вбивали знекровленням. Низхідні грудні аорти швидко видаляли для гістологічного та біохімічного аналізу.

Рівень ліпідів у плазмі крові

Рівні загального холестерину, холестерину ліпопротеїдів низької щільності (ЛПНЩ) та холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛПВЩ) вимірювали на початковому рівні та через 2 місяці, 4 місяці та 6 місяців за допомогою автоматичного ліпідного аналізатора (7250, Hitachi, Токіо, Японія ).

Гістологічний аналіз

Вимірювали площі атеросклеротичних уражень грудної аорти. 5 Грудна аорта була зафіксована забуференним формаліном. Тканину, що фіксується, фарбували Oil Red O для візуалізації присутності відкладень ліпідів на поверхні інтими. Атеросклеротичну площу розраховували як відношення зафарбованої олійно-червоним-O-плями до загальної площі поверхні за допомогою аналізатора зображення (VM-30, Olympus, Токіо). Імунофарбування антитілами до макрофагів використовували для фарбування тканини, використовуючи антитіло HAM-56 (DAKO Corporation, Carpinteria, CA, USA). 10

Судинна реакція

Сонні артерії видаляли для експериментів з розслаблення судин. Артерії були розрізані на гвинтові смужки довжиною 15 мм і шириною 2,0 мм. Смужку артерії помістили на міограф під напругою у спокої 2,0 г. Середовищем для купання був розчин Тирода (137 ммоль/л хлориду натрію, 2,7 ммоль/л хлориду калію, 1,8 ммоль/л хлориду кальцію, 1,1 ммоль/л хлориду магнію, 0,42 ммоль/л дигідрофосфату натрію, 12 ммоль/л бікарбонату натрію та 5,7 ммоль/л глюкози, рН 7,4). Середовище підтримували при 37 ° С і безперервно барботували з 5% СО2 в кисні. Після періоду рівноваги артерію стискали норадреналіном (1 мкмоль/л), а потім розслабляли ацетилхоліном залежно від дози (10 нмоль/л до 1 мкмоль/л). 11

Маркери сироватки

Набори ІФА використовувались для визначення сироваткових рівнів трансформуючого фактора росту (TGF) -β1, фактора, що стимулює колонію макрофагів (M-CSF), і молекули внутрішньоклітинної адгезії (ICAM) -1 (R&D Systems, Міннеаполіс, Мічиган, США).

Статистичний аналіз

Усі результати представлені як середнє значення ± стандартна похибка середнього значення. Відмінності вважалися значними на

Результати

Загальні умови

Усі мавпи здавались здоровими, і не було різниці у масі тіла, СБП або частоті серцевих скорочень серед тварин групи нормального харчування та тварин групи високого рівня холестерину, які отримували олмесартан або не отримували лікування через 1 місяць, 3 місяців і 6 місяців.

Рівень ліпідів у плазмі крові

Через 2 місяці, 4 місяці та 6 місяців рівні загального та холестерину ЛПНЩ у групі з високим рівнем холестерину були значно вищими, ніж у групі з нормальним харчуванням ( Фігура 1

антиатеросклеротична

Гістологічний аналіз

На малюнку 2 показані сегменти аорти, забарвлені Олійним Червоним O від трьох груп мавп. Ділянки атеросклеротичних уражень в грудних аортах не спостерігались у групі із нормальним харчуванням. У групі з високим рівнем холестерину дієта відношення атеросклеротичної площі до загальної площі становила 72 ± 6%, тоді як у групі, яка харчувалася дієтою з високим вмістом холестерину та лікуванням олмесартаном, це співвідношення було значно зменшено до 25 ± 14% ( Малюнок 2

Сегменти аорти, забарвлені Олійним Червоним O від мавп, яких годували (a) нормальне харчування, () дієта з високим вмістом холестерину та (c) дієта з високим вмістом холестерину плюс лікування олмесартаном (10 мг/кг/добу).

На малюнку 3 представлені типові фотографії поперечних зрізів аорти з груп, яким годували нормальну дієту, дієту з високим вмістом холестерину та дієту з високим вмістом холестерину, а також лікування олмесартаном. Інтимальна зона та відношення інтимної зони до медіальної в групі з високим рівнем холестерину були значно зменшені при лікуванні олмесартаном ( Малюнок 3

Типові поперечні зрізи грудних аорт мавп, яких годували (a) нормальне харчування, () дієта з високим вмістом холестерину та (c) дієта з високим вмістом холестерину плюс лікування олмесартаном (10 мг/кг/добу).

Судинна реакція

Ацетилхолін (10–1000 нмоль/л) викликав ендотелій-залежну релаксацію в залежності від концентрації у всіх групах. Ендотелій-залежне розслаблення у групі з високим рівнем холестерину в раціоні було значно знижено порівняно з такою в групі з нормальним харчуванням (

Обговорення

Проліферація інтимної зони атеросклеротичних уражень головним чином залежала від накопичення макрофагів. Ці висновки також спостерігались при атеросклеротичних ураженнях людини. 19,20 Кейдар повідомив, що А II викликає модифікацію ЛПНЩ до окисленого ЛПНЩ, який потрапляє в макрофаги, щоб стимулювати утворення пінних клітин. 21 Ангіотензин II також індукує накопичення макрофагів шляхом індукції моноцитарного хемоаттрактантного білка-1, який, як відомо, індукує активацію та міграцію моноцитів. Більше того, у цьому дослідженні олмесартан схильний знижувати рівні M-CSF та ICAM-1 у сироватці крові, що також викликає інфільтрацію моноцитів у інтимний шар та активацію макрофагів, і ці дії можуть також зменшити накопичення макрофагів. в інтимному шарі. Тому зменшення накопичення макрофагів в інтимному шарі за допомогою олмесартану може бути основним механізмом придушення інтимної зони.