Ефекти фізичних вправ та втрати ваги на фактори ризику серцево-судинної системи у чоловіків із надмірною вагою

Кафедра біомедичних наук факультету охорони здоров'я та медичних наук Університету Копенгагена, Копенгаген, Данія

Адреса для запитів на передрук та іншої кореспонденції: М. Розенкільде, департамент біомедичних наук, ун-т. Копенгагена, Блегдамсвей 3, 2200 Копенгаген N, Данія (електронна пошта: [електронна пошта захищена]).

Кафедра клінічної медицини факультету охорони здоров'я та медичних наук Університету Копенгагена, Копенгаген, Данія

Rigshospitalet, Копенгаген, Данія

Анотація

Рис. 1.Потік учасників. С, контроль; D, дієта; Т, навчання; T-iD, дієта з підвищеним тренуванням.

Зразки крові.

Артеріалізовані зразки крові збирали в крижані пробірки і негайно центрифугували (4000 об/хв при 4 ° C протягом 10 хв), а плазму виділяли і зберігали при -80 ° C до аналізу. У пробірках для вимірювання TC, LDL-C, HDL-C, apoA1, apoB і TG містився гепарин (10 мкл/мл), а в трубках для вимірювання окислення до β-HDL та LDL-C містився EDTA (10%, 15 мкл/мл).

Ліпіди та ліпопротеїни плазми.

Ніякого додавання інгібіторів LCAT та жодної іншої попередньої обробки не проводили. TC, LDL-C, HDL-C та TG у плазмі крові досліджувались ферментативно (Cobas; Roche Diagnostics, Мангейм, Німеччина). apoA1 та apoB аналізували за допомогою імунотурбідиметричної процедури, визначеної модулем Roche Modular Analytics (SWA) Modul P (Roche Diagnostics) відповідно до технічних вимог виробника та з використанням відповідних реагентів.

Для виділення ліпопротеїнів 1 мл плазми піддавали ультрацентрифугуванню для отримання VLDL-C (d 2+ і вимірюється за допомогою моніторингу утворення кон'югованих дієнів. Кінетику окислення LDL-C визначали, контролюючи зміну поглинання. Сто п'ятдесят мікролітрів LDL-C (100 мкг/мл) поміщали в 96-лункову мікропланшет (Costar UV-Transparent Microplates; A. Daigger, Vernon Hills, IL), і окислення ініціювали додаванням 16,7 мкл CuSo4 (25 мкмоль/л). Абсорбцію кожної лунки постійно контролювали при 234 нм з інтервалом 2,5 хв протягом 10 год при 26 ° C, використовуючи планшетний зчитувач із програмним забезпеченням KC 4 (Bio-Tek Instruments, Копенгаген, Данія). Всі зразки проводили з подвійним визначенням, і зразки від кожного суб'єкта проводили в одному і тому ж аналізі.

Профіль поглинання та часу був розділений на три фази, фазу затримки, фазу розповсюдження та фазу розкладання (10), а окислюваність LDL-C описується різними параметрами профілю. Максимальна кількість кон'югованих дієнів, що утворюються в LDL-C, оцінювали як максимальне значення поглинання (10). Максимальна швидкість окислення була розрахована як нахил кривої під час фази лінійного поширення. Час відставання оцінювали, проводячи перпендикулярну пряму до х-осі від перетину двох прямих ліній, проведених крізь фази відставання та поширення кривої поглинання (9). CV між подвійними визначеннями становили 3,8, 4,3, 2,4 за час затримки, максимальну швидкість окислення та максимальну абсорбцію відповідно.

Попередньо β-ЛПВЩ.

Кількість попереднього β-HDL визначали у фракціях HDL-C шляхом схрещеного імуноелектрофорезу (31). У першому вимірі електрофорезу були розділені ліпопротеїни з α- та β-рухливістю. Електрофорез проводили в 1% (мас./Об.) Агарозному гелі (Agarose HSA Litex, Glostrup, Данія), розміром 10 × 20 см, у барбітальному буфері (рН 8,6; Регіон Hovedstadens Apotek, Herlev, Данія). Плазму розбавляли H2O у 10 разів і застосовували при 7,5 мкл/лунку. Перший розмір тривав 5,5 см протягом 45 хв при 300 В. Доріжка ліпопротеїдів у першому гелі була розрізана на шматочки по 1 см і переміщена в плівку GelBond (Cambrex, East Rutherford, NJ), розміром 10 × 10 см. Шістдесят мілілітрів 1% агарозного гелю змішували при максимумі 56 ° C з 250 мкл поліклонального кролячого анти-людини apoA1 (Dako, Glostrup, Данія). Смужку гелю відпалювали розплавленим агарозним гелем, що містить антитіло. Електрофорез другого виміру проводили до рівноваги при 4 ° С при 80 В у барбітальному буфері (рН 8,6). Виділені ліпопротеїнові антигени з першого агарозного гелю мігрували у другий агарозний гель і осаджувались антитілом. Гель промивали H2O і пресували, а комплекси апоА1-імуноглобуліну фарбували блискучим синім кумасі (5%, область Hovedstadens Apotek) перед сушінням.

Всі зразки були проведені в двох примірниках. Зразки до та після втручання з кожного суб'єкта проводили одночасно. CV між подвійними визначеннями становив 19,0% для пре-β-HDL. Засліплені для втручання, ділянки під кривими імунопреципітації вимірювали тричі після фарбування за допомогою програмного забезпечення Leica IM50 Image Manager (Leica Microsystems, Wetzlar, Німеччина). Середнє значення CV для потрійних вимірювань становило 3,4%. CV для α-піків становив 0,8%, а CV для pre-β піків - 6,2%. Області до β-ЛПВЩ виражаються у відсотках від суми апоА1, присутніх у зонах до β-ЛПВЩ та α-ЛПВЩ. Концентрації пре-β-ЛПВЩ також вказані в абсолютних кількостях (грами апоА1, присутніх у частинках пре-β-ЛПВЩ на літр плазми), розраховані як г/л.

Статистичний аналіз.

Описові дані до і після втручання описуються як засоби ± SD. Відмінності в групах описуються як засоби із двосторонніми 95% довірчими інтервалами (ДІ) та між групами як скориговані середньоквадратичні середні значення з двосторонніми 95% ДІ. Зміни всередині групи оцінювались за допомогою пар т-тесту та для оцінки основних ефектів втручання оцінювали відмінності між групами, використовуючи аналіз коваріації зі значеннями постінтервенції як залежних змінних та вихідних значень та присвоєння групі як коваріати. Усі попарні порівняння коригували за допомогою процедури Тукі. Зв'язок між базовими показниками та оцінками змін оцінювали за допомогою кореляційного аналізу Пірсона. Неналагоджений субаналіз був проведений за допомогою непарного т-тест для порівняння змін ТК, ЛПНЩ, ХС ЛПВЩ і ТГ протягом втручання для осіб із концентрацією дисліпідемії та нормоліпідемії на початковому рівні (22). Рівень значущості був обраний як -1 кг · -1 збільшився як наслідок тренування як в Т, так і в Т-іД порівняно з С (