Ефективність, безпека та рецидив нових прогестинів та селективного модулятора рецепторів прогестерону для
Анотація
Передумови
Сучасні методи лікування ендометріозу дуже обмежені. Розроблені прогестинові та селективні модулятори рецепторів прогестерону (SPRM), але їх ефективність, безпека, механізм та рецидив при ендометріозі не вивчені до кінця.
Методи
Для порівняння терапевтичних, побічних ефектів та терапевтичної дії Есмії, Дюфастона та Дієногеста при ендометріозі. Експериментальний ендометріоз був викликаний або внутрішньоочеревинною, або підшкірною трансплантацією ендометрія миші. Порівняли розмір ураження, вагу та гістологію наприкінці втручання. Вивчали експресію суміжних маркерів в ендометріотичних ураженнях. Вимірювали вагу тіла, матки та яєчників, залози та товщину ендометрія (ETI) та кількість фолікулів. Для періодичного дослідження відстежували ріст уражень до та після втручання.
Результати
Після лікування Есмією, Дюфастоном, Дієногестом розмір ураження та вага значно зменшились. Експресія проліферації Pcna суттєво знизилась у всіх групах, але клітини проліферації значно зменшилась лише у групі Дюфастона. Експресія апоптозу Mapk1 та TUNEL-позитивні клітини значно збільшились у групі Дюфастона. Експресія адгезії Mmp2 та Itgavβ3 була значно підвищена в групі Esmya. Експресія Plau, Hif1α та Vegfa, рівні PGE2 в очеревинній рідині, а також експресія ERα та ERβ; тоді як експресія PR була значно нижчою у всіх групах. Кількість залоз ендометрія в матці суттєво збільшилася в групі Дієногест, ЕТІ значно знизилася в групі Дюфастон, а АФК значно збільшилася в групі Есмія. Після припинення лікування ріст уражень швидко відскакував у групах Дієногеста та Дюфастона, але повільно - у групі Есмія.
Висновок
Есмія, Дюфастон та Дієногест - ефективні антиендометріозні препарати, спрямовані на проліферацію, апоптоз та адгезію. Есмія, Дюфастон і Дієногест добре переносимі, хоча у Дієногеста була виявлена залозиста гіперплазія ендометрія, атрофія ендометрія в Дюфастоні, скупчення фолікулів в Есмія.
Передумови
Ендометріоз - це загальний та хронічний доброякісний гінекологічний розлад, що характеризується наявністю тканин, схожих на ендометрій, поза порожниною матки. Це вражає близько 10% репродуктивних жінок та до 24-50% безплідних жінок [1, 2]. Хоча ендометріоз є естрогензалежним захворюванням, етіологічні дослідження показали, що патогенез ендометріозу є складним і багатофакторним [3,4,5,6]. Найбільш загальновизнаною та науково підтвердженою теорією виникнення ендометріозу є ретроградна менструація з огляду на анатомічне розташування та гістохімічні характеристики ендометріотичних уражень [4, 7]. Клінічні симптоми ендометріозу включають, але не обмежуючись, тазові болі, дисменорею, диспареунію та безпліддя [8], які мають суттєвий вплив як на загальне, так і на психічне здоров'я людей, що страждають [9, 10]. Наявне лікування ендометріозу, включаючи операцію з видалення та гормональні препарати [11], все ще не є ідеальним для репродуктивних жінок, які хотіли б зберегти свою плодючість без побічних ефектів та рецидивів.
У цьому дослідженні ми мали на меті порівняти антиендометріотичні ефекти, репродуктивні побічні ефекти, терапевтичний механізм та рецидив Esmya, Duphaston та Dienogest в експериментальній моделі миші на ендометріозі.
Методи
Хімічні речовини та реактиви
17-β-естрадіол був придбаний у Sigma Chemical Co. (Сент-Луїс, США). Кетамін, ксилазин та ацепромазин були придбані у Alfasan (Нідерланди, Голландія); Кроляче моноклональне антитіло до Ki67 було придбано за технологією Cell signaling technology (D3B5, Danvers, USA). Набір для виявлення апоптозу in situ був придбаний у Merck Millipore (США). Реагенти для RT-PCR та кількісної PCR були придбані у TaKaRa (TaKaRa Bio, Shiga, Японія). Набори естрадіолу та прогестерону ELISA були отримані від Cayman Chemical, США. Комплект ELISA для простагландину E2 був придбаний у Abcam (Abcam, Англія).
Модель тварин та ендометріозу
Шість-сім тижнів самок мишей C57BL/6 утримували у вільних від патогенів приміщеннях для тварин із фіксованим циклом 12 годин світла та 12 годин темряви. Забезпечували стандартні лабораторні чау та чисту воду, а всім мишам давали змогу акліматизуватися принаймні за 1 тиждень до експериментів. Суміш кетаміну при 100 мг/кг, ксилазину при 10 мг/кг та ацепромазину по 3 мг/кг вводили внутрішньочеревно для знеболення мишей перед інвазивною операцією. На основі різних цілей експериментів у цьому дослідженні було встановлено дві різні моделі ендометріозу мишей, як показано нижче. Еструальний цикл тварин синхронізували, передаючи змочену сечею чоловічу підстилку кожні 5 днів як для моделі миші з ІР, так і для ендометріозу. [27]. Усі експерименти на тваринах були схвалені Комітетом з етики експериментів на тваринах, Китайський університет Гонконгу.
Внутрішньочеревна (ІП) ендометріозна модель миші для терапевтичної безпеки та механістичного дослідження
Модель ендометріозу ІР була встановлена з незначними модифікаціями, як описано раніше [27, 28]. Коротко кажучи, мишей випадковим чином поділяли на дві групи - донорів або реципієнтів. На 0-й день матку видаляли від кожної донорської миші після умерщвлення і промивали в PBS 3 рази. Тканини ендометрію готували з кожного рогу матки 2-мм біопсійним пуншем. Після того, як тканини ендометрію були підготовлені, миші-реципієнта знеболювали і робили розріз 0,5-1 см на середній лінії стінки живота мишки та очеревини. Колон витягували обережно і підтримували гідратацію стерильним PBS. Три шматочки тканин ендометрію зашивали на судини брижі за допомогою 6–0 хірургічних ниток у кожної реципієнтної миші. Товсту кишку акуратно повернули в порожнину очеревини; стінку живота та шкіру закривали по 5–0 хірургічних ниток окремо. Потім мишей клали на теплу подушечку до повного відновлення наркозу після операції.
Модель миші для підшкірного (SC) ендометріозу для дослідження рецидивів
Ми встановили іншу модель ендометріозу миші шляхом трансплантації SC, щоб відстежувати динамічні зміни зростання ураження під час та після медичних втручань. Повідомлялося, що як модель ІР, так і СК демонструє подібний розвиток ендометріозу щодо цистоподібного росту, а також залозистої та епітеліальної структур уражень [27, 29]. Той самий штам C57BL/6 мишей використовували для встановлення моделі миші SC ендометріозу миші, як описано раніше [30, 31]. Коротко кажучи, матку видаляли з мишей-донорів, а тканини ендометрію готували як модель ІР, згадану вище. Під наркозом шкіру живота голили, а потім робили 3-міліметровий розріз шкіри на середній лінії живота кожної миші-реципієнта, а двосторонні кишені СК створювали обережно, не пошкоджуючи стінку живота. По одному шматочку тканини ендометрію поміщали в кожну кишеню, а потім розріз шкіри закривали 5–0 хірургічними нитками.