Хімічний склад та протимікробна активність ефірної олії тимусу вульгарного

О Боруга

* Кафедра офтальмології, Університет медицини та фармації Віктора Бабеша, Тімішоара, Румунія

С Цзяну

** Департамент харчових наук, факультет технологій харчової промисловості, Банатський університет сільськогосподарських наук та ветеринарної медицини, Тімішоара, Румунія

C Мішка

Я Голец

*** Кафедра менеджменту, факультет економіки та ділового адміністрування, Західний університет Тімішоари, Тімішоара, Румунія

А. Т. Груя

**** Центр імунології трансплантатів, окружна лікарня Тімішоара, Тімішоара, Румунія

Ф. Г. Горхат

***** Кафедра мікробіології, Університет медицини та фармації Віктора Бебеса, Тімішоара, Румунія

Анотація

Дослідження було покликане визначити хімічний склад та антимікробні властивості ефірної олії Thymus vulgaris, культивованої в Румунії. Ефірне масло було виділено з виходом 1,25% дистиляцією парою з надземної частини рослини і згодом проаналізовано за допомогою ГХ-МС. Основними компонентами були р-цимен (8,41%), γ-терпінен (30,90%) та тимол (47,59%). Його антимікробну активність оцінювали на 7 поширених харчових бактеріях та грибках методом дискової дифузії. Результати демонструють, що випробувана ефірна олія Thymus vulgaris має сильні протимікробні властивості і може в майбутньому представляти нове джерело природних антисептиків, що застосовуються у фармацевтичній та харчовій промисловості.

Вступ

Рід Thymus, представник сімейства Lamiaceae, містить близько 400 видів багаторічних ароматичних, вічнозелених або напіввічнозелених трав'янистих рослин з безліччю підвидів, різновидів, різновидів та форм [1]. У Румунії рід тимуса містить один вид, культивований як ароматична рослина (Thymus vulgaris), та інші 18 диких видів [2]. T. vulgaris (чебрець), місцево відомий як "цимбру", широко використовується в румунській народній медицині завдяки своїм відхаркувальним, протикашльовим, антибронхолітичним, спазмолітичним, глистогінним, ветрогонним та сечогінним властивостям.

Різні дослідження мали на меті дослідити хімічний склад та біологічні властивості ефірної олії T. vulgaris (EO). Відповідно до Європейської фармакопеї 5.0 (Ph. Eur. 5.0) [3], мінімальний вміст ЕО у Т. vulgaris становить 12 мл/кг, але хімічний склад демонструє варіації, в основному повідомляється про шість хемотипів, а саме гераніол, ліналоол, гамма-терпінеол, карвакрол, тимол та транс-туян-4-ол/терпінен-4-ол [4,5]. І вихід ізоляції, і хімічний склад ЕО залежать від ряду факторів, таких як навколишнє середовище, регіон росту та практика вирощування [6]. На додаток до смакових властивостей, що визначаються складовими активними інгредієнтами, чебрець ЕО проявляє значну протимікробну активність [4,7-9], а також сильні антиоксидантні властивості [2,8].

Метою цього дослідження є визначення хімічного складу разом з антимікробними властивостями ЕО Т. vulgaris, культивованого в Румунії, з метою виявлення нових джерел природних антисептиків із застосуванням у фармацевтичній та харчовій промисловості.

Матеріали і методи

Сирий матеріал. Чебрець збирали протягом сезону цвітіння (липень 2012 р.) Із району навколо комуни Бростені - повіт Мехедінці, Румунія. Рослинний матеріал сушили в добре провітрюваних приміщеннях, захищали від прямих сонячних променів, а потім зберігали у двошарових паперових пакетах при температурі 3-5 ° С до обробки. Зразок ваучера (V.FPT-451) був зданий на зберігання в Гербарій фармацевтичного факультету Університету медицини та фармації «Віктор Бабеш», Тімішоара, Румунія.

Виділення ефірних масел. ЕО отримували гідродистиляцією, згідно з Ph. Eur. 5,0 [3], за допомогою модифікованого апарату Клівенджера (з охолоджуваною зоною збору ЕО для запобігання появи артефактів). ЕО сушили на безводному сульфаті натрію (Sigma-Aldrich Chemie GmbH) і зберігали у щільно закупореній бурій скляній пляшці при 0-4 ° С для випробування.

Газова хроматографія-мас-спектрометрія. Зразки аналізували за допомогою газової хроматографії за допомогою приладу HP6890 у поєднанні з мас-спектрометром HP 5973. Газовий хроматограф оснащений інжектором, що не розщеплюється, та 5-процентним фенил-метилполісилоксаном Factor FourTM VF-35ms, 30 м, 0,25 мм, товщиною капілярної колонки 0,25 мкм. Умови газової хроматографії включають діапазон температур від 50 до 250 ° C при 40 ° C/хв, із затримкою розчинника 5 хв. Інжектор підтримували при температурі 250 ° С. Інертним газом був гелій при витраті 1,0 мл/хв, а об'єм введення в режимі без розщеплення становив 1 мкл. Умови МС були такими: енергія іонізації, 70 еВ; температура квадруполя, 100 ° C; швидкість сканування, 1,6 сканування/с; діапазон ваги, 40-500 аму.

Розраховували відсотковий склад летких сполук. Якісний аналіз базувався на відсотках площі кожного піку зразків сполук. Мас-спектр кожної сполуки порівнювали з мас-спектром з бібліотеки спектру NIST 98 (програмне забезпечення Національного інституту науки і технологій США).

Визначення антимікробної активності. Чебрець ЕО тестували на 7 поширених харчових бактеріях і грибках: золотистий стафілокок (ATCC 25923), синьогнійна паличка (ATCC 27853), сальмонела тифімуріум (ATCC 14028), кишкова паличка (ATCC 25922), клебсієла пневмонія (ATCC 13882cus) faecalis (ATCC 29212) та Candida albicans (ATCC 10231), використовуючи метод дифузійного диску, як описано раніше [10]. Коротко кажучи, суспензію досліджуваного мікроорганізму (10 ^ 6 клітин/мл-1) розподіляли на пластинах із твердим носієм (агар Мюллера-Хінтона для бактерій та агар Сабуро-клорамфеніколу для грибів). Паперові диски (фільтрувальний папір Whatman No 1 - діаметром 6 мм) просочували 5, 10, 15 і 20 мкл ЕО і поміщали на інокульований агар. Платівки, інокульовані штамами бактерій, інкубували протягом 24 годин при 37 ° C та 48 годин при 30 ° C для грибів відповідно. Як позитивний контроль для штамів бактерій використовували ципрофлоксацин (30 мкг/диск) та цефалексин (10 мкг/диск), а для грибів - флуконазол (10 мкг/диск). Після інкубації діаметр зони гальмування вимірювали в міліметрах. Кожен тест проводили у трьох примірниках щонайменше у трьох окремих експериментах.

Статистичний аналіз. Статистичний аналіз проводили за допомогою SPSS версії 21 (IBM Corp., NY). Середню зону гальмування для кожної групи з дев'яти спостережень порівнювали зі значенням діаметра диска (6 мм) за допомогою t-критерію. Процедура GLM була використана для проведення двостороннього дисперсійного аналізу (ANOVA) в зонах гальмування. Тип мікроорганізму та кількість ефірної олії використовувались як фактори у повній факторіальній моделі. Постійні тести для кожної кількості ефірної олії проводили за допомогою методу HSD Tukey, щоб порівняти вплив на різні типи мікроорганізмів.