Індукований ожирінням колоректальний рак обумовлений калорійним приглушенням паракрину гуанілін-GUCY2C

Йєру Е. Лін

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Франческа Колон-Гонсалес

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Ерік Бломен

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Гілберт В. Кім

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Аманда Айнг

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Брайан Стокер

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Джастін Рок

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Адам Е. Снук

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Тингтінг Чжан

2 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ біостатистики, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Террі М. Гіслоп

3 Кафедра біостатистики та біоінформатики Університету Дьюка, Дарем, штат Північна Кароліна

Міхал Томчак

4 Відділ гастроентерології, гепатології та ендоскопії та Інститут біомедичних досліджень, Бригама та жіноча лікарня та Гарвардський центр травних захворювань, Гарвардська медична школа, Бостон, Массачусетс

Річард С. Блюмберг

4 Відділ гастроентерології, гепатології та ендоскопії та Інститут біомедичних досліджень, Бригама та жіноча лікарня та Гарвардський центр травних захворювань, Гарвардська медична школа, Бостон, Массачусетс

Скотт А. Вальдман

1 Кафедра фармакології та експериментальної терапії, Відділ клінічної фармакології, Університет Томаса Джефферсона, Філадельфія, Пенсильванія

Пов’язані дані

Анотація

Вступ

Матеріали і методи

Тваринні моделі

колоректальний

(А) Конструкція для трансгенної експресії гуаніліну в кишечнику. Трансгенна експресія гуаніліну (B) врятувала сигнал GUCY2C, що зменшує дисфункцію епітелію, спричинену ВЧ-дієтою, та (C-D) майже повністю усуває пухлину, індуковану ВЧ-дієтою та AOM у товстій кишці VilGuca2a +, але не контролює VilGuca2a-, мишей. Результати імуноблоту представляють середнє значення ± SEM 5 мишей. VilGuca2a (-), миші C57BL/6, що експресують vil-Cre-ER T2 (дикий тип гуаніліну); VilGuca2a (+), миші C57BL/6, що експресують vil-Cre-ER T2 і несуть трансгенний гуанілін.

Генотипування

Генотип Gucy2c був підтверджений за допомогою ПЛР з праймерами: прямий: 5'-AGGTCATGACGTCACTGCTGGGCC-3 '; реверс: 5'-TGTCCAGTCCTTCCTCCACAG-3 '; неоміцин: 5'-GGTGGGCTCTATGGCTTC-3 '(7). Генотип ROSA-STOP flox -Guca2a підтверджено за допомогою ПЛР з праймерами: вперед: 5'-CCGCCGTTGTTGTTATTGTAG-3 '; реверс: 5'-GTTGTGGTG ATAGGTGGCAAG-3 '. Генотип Villin-Cre-ER T2 був підтверджений за допомогою ПЛР з праймерами: вперед: 5'-GAAAATGCTTCTGTCCGTTTG-3 '; реверс: 5'-ATTGCTGTCACTTGGTCGTG-3 '(9).

Модель колоректального туморогенезу

Для мишей Gucy2c +/+ (Lean, HF) та Gucy2c -/- (Lean) мишам (6 тижнів у віці) азоксиметан (AOM 8 мг/кг; Sigma, Сент-Луїс) вводили щотижня через інтраперитонеальні ін’єкції протягом 6 тижнів. Перераховували пухлини та визначали їх розміри через 8 тижнів після останньої дози АОМ під розсікаючим стереомікроскопом шляхом сліпого аналізу. Навантаження на пухлину на тварину обчислювали як суму площі (діаметр 2) окремих пухлин (7). Для моделі ROSA-STOP flox -Guca2a-vil-Cre-ER T2 та відповідних контролів (рис. 4в) миші сиділи на ВЧ дієті, починаючи з 4 тижнів віку. Тамоксифен (20 мг/кг в/в) вводили кожні 4 тижні для посилення експресії гуаніліну, починаючи з 4 тижнів до перерахування пухлини. Шість доз AOM (10 мг/кг) вводили щотижня, починаючи з 5 тижнів. Перераховували пухлини та визначали їх розміри кількісно у віці 22 тижнів (6, 7). Для мишей Gucy2c +/+ (нежирних, HC) мишам (віком 6 тижнів) вводили AOM (12 мг/кг) щотижня протягом 6 тижнів. Перераховували пухлини та визначали їх розміри в кількісних показниках 12 тижнів після останньої дози AOM. Дози AOM в різних моделях дієти були встановлені в пілотних дослідженнях, щоб забезпечити принаймні