Leaner Mutant Mouse - огляд тем ScienceDirect

Більш стрункі миші виявляють мозочкову атаксію, відсутність епілепсії та паріоксизмальної дискінезії та важку атрофію мозочка в результаті дегенерації приблизно половини гранул мозочка, клітин Пуркіньє та Гольджі.

mutant

Пов’язані терміни:

  • Фактор некрозу пухлини Альфа
  • Макрофаги жирових тканин
  • Фенотип
  • Мікрофлора
  • Флора кишечника
  • Жирова тканина
  • Мутант миші
  • Резистентність до інсуліну
  • Біла жирова тканина
  • Об/об миша

Завантажити у форматі PDF

Про цю сторінку

Миші Моделі дистонії

b. Руховий розлад (Відеосегмент 2)

Більш струнка миша

Характеристика гетерозиготних струнких мишей

Ранні звіти припускали, що гетерозиготних худих мишей поведінково і морфологічно не можна відрізнити від мишей дикого типу, але зараз ми знаємо, що це не так. Функціональні дослідження показали зниження на 30% провідності Са 2+ у гетерозиготних виснажених клітинах Пуркіньє. Гетерозиготні стрункіші миші демонструють вікові порушення у ротароді та підвісному дроті, а також просторові порушення навчання та пам’яті у водному лабіринті Морріса. Прогресуюча дисфункція в рефлексах втечі також спостерігається у гетерозиготних худорлявих мишей, і вони виявляють порушення рухового навчання у вестибуло-окулярному рефлексі, що дозволяє припустити, що тонких порушень струмів Cav2.1 Ca 2+ достатньо для порушення моторної функції.

Вимірювання біологічних реакцій за допомогою автоматизованої мікроскопії

Ральф Дж. Гаріппа,. Ахім Кірш, у Методи в ензимології, 2006

Підготовка тканин

Використовуються три мозку із ожирінням, спричиненим дієтою (DIO), та три нежирних миші (C57Bl/6J) (Van Heek et al., 1997). В умовах, що не містять РНКази, мозок швидко видаляють, поміщають у кріомолд, покривають сполукою ОКТ (заморожена тканина, вкладена в середовище Sakura Finetek, Торранс, Каліфорнія), заморожують у рідкому азоті та ділять серіями на 7-10 мкм в кріостат. Секції встановлюються на простих (без покриття) чистих предметних стеклах мікроскопа і негайно розміщуються на сухому льоду. Зрізи зберігаються при –70 °. Слайди фіксують у 70% етанолі, промивають у дистильованій воді без RNaase, забарвлюють у крезилфіолетовий ацетат (для виявлення цікавих ядер) та зневоднюють у градуйованому етанолі (95% та абсолютний) з кінцевими 5 хв у ксилолі як останній крок процедури. Потім предметні стекла поміщають в ексикатор для сушіння. Для мікроскопії лазерним захопленням використовують повністю висушені предметні стекла.

Відповідно до протоколу виробника, мікродисекції ядер з наступних гіпоталамічних областей проводяться для подальшого вивчення: дугоподібного ядра, зубчастої звивини, дорсомедіального гіпоталамуса, бічного гіпоталамуса, медіальної мигдалини, середньої висоти, паравентрикулярного ядра та вентромедіального гіпоталамуса. Ці гіпоталамічні регіони ідентифіковані як посилання на них у Franklin and Paxions (1997). Після проведення мікродисекції лазерного захоплення ковпачок (із захопленими клітинами) поміщають у реактивну пробірку, що містить 200 мкл денатуруючого буфера РНК (GITC) та 1,6 мкл β-меркаптоетанолу. Потім пробірку перевертають на 2 хв, щоб тканина перетравлювалася з кришки. Потім реагент, що містить мікророзсічені ядра, готовий до екстракції РНК, виділення, ампліфікації тощо.

Методи біології жирових тканин, частина В

Цинхуей Сю,. Девід А. Бернлор, у Методи в ензимології, 2014

2.1.1 Приготування екстрактів з білої жирової тканини епідидиму

Один грам епідидимальної білої жирової тканини (EWAT) від нежирних або ожирілих мишей інкубують на льоду в 1 мл гідрозидного буфера рН 5,5 біотину (100 мМ ацетату натрію; 20 мМ NaCl; 0,1 мМ EDTA, доповненого інгібіторами протеази; і 0,25 мМ бутильованого гідрокситолуол (BHT)) та гомогенізували протягом 30 с за допомогою електронного гомогенізатора (PowerGen 125). Проби короткочасно вихровують і центрифугують при

1200 об/хв протягом 10 хв при 4 ° C у мікроцентрифузі для плавання ліпідного осаду. Нижню водну фазу та будь-які гранули переносять у нову пробірку для центрифуги та додають SDS до кінцевої концентрації 2%. Потім зразки нагрівають при 65 ° C протягом 5 хв і піддають ультрацентрифугуванню при 100000 × g протягом 1 години при 4 ° C для видалення нерозчинного залишку. Концентрацію солюбілізованого в мийному засобі білка визначають за допомогою аналізу біцинхонінової кислоти (Sigma-Aldrich, St Louis, MO).

Миші Моделі дистонії

27.2.2.2.2 Рухові розлади (за спостереженнями авторів)

Неповнолітні мутанти Cacna1a-нуль виявляють рухові розлади, подібні до неповнолітніх витончених мутантів, з деякими незначними відмінностями. У порівнянні з більш худими мутантами, нуль-мутанти Cacna1a набагато менші протягом усього розвитку, мають більш глибокі рухові порушення та демонструють значно меншу спонтанну активність. Вони майже рівномірно гинуть у віці 3-4 тижнів, коли у звичайних мишей відбувається перехід від вигодовування до вживання твердої їжі. За умови щоденної парентеральної гідратації та харчування дуже малий відсоток α1A-нульових мутантів доживає до дорослого віку. Дорослі мутанти Cacna1a-нуль знову нагадують дорослих худорлявих мишей, але вони мають більш серйозні рухові порушення, що характеризуються акінезією, брадикінезією, жорсткістю рухів і підвищенням м’язового тонусу. Вони не можуть їсти та пити самостійно, для виживання потребують щоденних парентеральних добавок. Руховий розлад нокаутів Cacna1a, як і більш худих мишей, найбільш відповідає генералізованій дистонії.

Солодкий та смак умами

Ендогенний лептин, ендоканабіноїди та ожиріння

Екзогенне введення лептину або ендоканабіноїдів пригнічує або посилює реакцію солодкого смаку у нежирних мишей відповідно. Однак внесок ендогенного лептину та ендоканабіноїдів у чутливість до солодкого смаку в цих дослідженнях не з'ясовано. Вводячи антагоніст лептину або антагоніст CB1, досліджували вплив ендогенного лептину та ендоканабіноїдів на солодкий смак (Niki et al., 2015).