Нагодування та метаболічні наслідки запланованого споживання великих страв із високим вмістом жиру
Т. Випікати
Абердинський університет, Інститут харчування та здоров’я Роветта, Група поглинаючих поведінок, Баксберн, Абердін, Великобританія
D.G.A. Морган
b AstraZeneca, Mereside, Alderley Park, Macclesfield, Великобританія
Дж. Мерсер
Абердинський університет, Інститут харчування та здоров'я Роветта, Група поглинання поведінки, Баксберн, Абердін, Великобританія
Анотація
1. Вступ
Генетичні моделі ожиріння, спричинені мутаціями одного гена, та спроектовані трансгенні лінії суттєво сприяли розумінню контролю над споживанням енергії та вагою тіла [1–3]. Інші дослідження енергетичного гомеостазу проводились із використанням гризучих моделей ожиріння, спричиненого дієтою (DIO), за умови, що це, як правило, обов’язкове годування дієтами з високим вмістом жиру або високою енергією [4,5]. Однак можна поставити під сумнів, чи є такі дієтичні маніпуляції найбільш доцільними для моделювання харчової поведінки людини, що призводить до ожиріння [5], де їжа є ключовим елементом вживання їжі та харчової поведінки [6]. У зв'язку з цим модель гризунів запланованого доступу до смачної дієти без обмеження їжі може бути більш доречною для імітації харчової поведінки людини та розвитку надмірної ваги та ожиріння.
2. Методи та матеріали
2.1. Тварини
32 самці щурів Спрег-Доулі з початковою масою тіла 190–200 г (лабораторії Чарльз-Рівер, м. Маргате, Великобританія) були акліматизовані в групах у зворотному циклі 12 год: 12 год світло-темно (вимкнення о 09:00, ZT12; загоряється о 21:00, ZT0; ZT, час Zeitgeber). Через два тижні щурів одиночно поселили в клітинах для годування/поїння TSE PhenoMaster/LabMaster (TSE Systems, Бад-Хомбург, Німеччина) та акліматизували на наступний тиждень до початку тижня вимірювань споживання їжі. Усі тварини мали доступ до звичайної дієти на гранулах (Special Diets Services, Witham, Великобританія, # 871505 CRM (P); 22% білка, 69% вуглеводів, 9% жиру за енергією, 2,67 ккал/г), якщо не зазначено інше. Вода була у вільному доступі в усі часи. Усі процедури були ліцензовані відповідно до Закону про тварин (наукові процедури) 1986 року та схвалені етичним комітетом CVGI АстраЗенеки, парк Олдерлі.
2.2. Дієтичні маніпуляції
2.3. Вимірювання споживання їжі та часовий аналіз споживання їжі
В останній тиждень періоду акліматизації (базовий тиждень) та протягом 6 тижнів дієтичних маніпуляцій споживання їжі вимірювали за допомогою системи TSE PhenoMaster/LabMaster, яка автоматично реєструє вагу з'їденої їжі. Кожна клітка мала два набори каліброваних харчових датчиків, які окремо реєстрували з’їдену їжу до чутливості 0,01 г, одна з яких мала автоматично керований рукав, що дозволяв отримати доступ до дієти з високим вмістом жиру лише під час планового годування. Розлив їжі був мінімізований за допомогою лотка для вилову. Кумулятивне споживання їжі реєстрували з інтервалом у 15 хв і підсумовували через 1 год, а потім усереднювали для тварини та дослідного тижня для статистичного аналізу.
2.4. Профілі глюкози, профілі інсуліну та пероральні тести на толерантність до глюкози
2.5. Циркулюючі гормони та метаболіти
Кінцеві зразки крові аналізували на вміст лептину, інсуліну, греліну, GLP-1, глюкози, тригліцеридів та неестерифікованих жирних кислот (NEFA). Концентрації лептину в сироватці крові вимірювали за допомогою набору для радіоімуноаналізу щурів (# RL-83K; LINCO Research, Пул, Великобританія). Чутливість становила 0,5 нг/мл, а коефіцієнт серцево-судинної діагностики становив 5,37%. Інсулін у плазмі крові вимірювали, як зазначено вище. Загальні концентрації греліну в плазмі вимірювали за допомогою набору для багаторазового аналізу щурів/мишей (# K150IOC-1; Meso Scale Discovery, Гейтерсберг, Меріленд, США) з чутливістю 1,3 пг/мл та CV протягом 3,94 % Активні концентрації GLP-1 у плазмі визначали, використовуючи багатовидовий набір ELISA (# EGLP-35K; Millipore, Billerica, MA, США). Чутливість аналізу становила 2 пг/мл, а коефіцієнт CV у межах аналізу становив 6,09%. Кров для активного аналізу GLP-1 відбирали в плазмові пробірки EDTA, що містять 10 мкл інгібітора DPP-IV (# DPP4; Millipore, Billerica, MA, США) та інгібітор протеази 500 мг одиниці апротиніну (# 10981532001; Roche Diagnostics Ltd., Burgess Hill, Великобританія) на 1 мл крові. Глюкозу в плазмі, тригліцериди та NEFA визначали за допомогою повністю автоматизованого аналізатора Konelab (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Чутливість аналізів становила 0,3 ммоль/л, 0,05 ммоль/л та 0,01 ммоль/л відповідно, з CV внутрішньо-аналізу 1,32%, 1,08% та 1,67%, відповідно.