Повна стаття Зменшений резерв яєчників, викликаний хронічним непередбачуваним стресом у мишей C57BL6

Хронічний недоступний стрес і заповідник яєчників у мишей

  • Повна стаття
  • Цифри та дані
  • Список літератури
  • Додаткові
  • Цитати
  • Метрики
  • Ліцензування
  • Передруки та дозволи
  • PDF

Анотація

长期 的 心理 压力 被 认为 是 卵巢 储备 （（DOR） 的 重要 原因。 但是, 缺乏 心理 压力 诱发 的 DOR 动物 模型。 旨在 验证 验证 8 周 慢性 不可 压力 压力 （CUS） 模式 对 C57BL/6 小鼠 卵巢 储备和 生殖 激素 分泌 的 影响。 我们 发现, 在 CUS 暴露 8 周 后, CUS 模型 小鼠 的 原始 卵泡 、 窦 前 卵泡 以及 黄 体 的 数量 显 著 减少。 与 对照 组 相比 模型, 模型 小鼠 的 血清 卵泡 刺激 素 素 、皮质 酮 水平 更高, 而 黄 体 生成 素 、 雌二醇 、 雄 激素 抗 苗 苗 勒 管 激素 水平 更低。 此外, 我们 发现 FSH 受体 和 AMH 蛋白 在 模型 小鼠 卵巢 中 被 下调。 尽管 两组 之间 产仔 数 未 发现 明显 但, 但 暴露 于 CUS 6 周 后, 模型 组 的 卵巢 储备 量 著 著 降低。 这些 结果 了 了 以下 我们: 我们 采用 的 8 周 CUS 模型 可以 诱导 C57BL/6 小鼠 的 DOR 模型, 并 可能 对 卵巢 储备 造成 长期 不利 影响。 因此, 我们 的 结果 表明 我们 已经 成功 建立 了 心理 应激 诱导 的 DOR 动物 模型, 可 用于 进一步 研究。

резерв

Китайські реферати перекладені професором доктором Сіаньян Руаном та її командою: Пекінська лікарня акушерства та гінекології, Столичний медичний університет, Пекін 100026, Китай.

Вступ

Зменшений резерв яєчників (DOR) визначається як проміжний стан між нормальною репродуктивною фізіологією та передчасною недостатністю яєчників і характеризується зменшенням кількості або якості наявного пулу ооцитів. Біомаркери DOR, що використовуються в клінічній практиці, включають, але не обмежуючись цим, нижчий АМГ, вищий ФСГ, ФСГ/ЛГ та кількість антральних фолікулів (АФК) [1]. Існуюча література вказує на те, що психогенні фактори виявились одним із основних елементів, що асоціюються з ДОР та порушують репродукцію жінок [2–5]. Однак через відсутність належної моделі тварини, яка має подібні симптоми ДОР, механізм причинності все ще незрозумілий.

Хронічний непередбачуваний стрес (CUS) - одна з найбільш часто використовуваних парадигм для викликання тривожної поведінки на моделях тварин та вивчення хронічних стресових захворювань. CUS складається з постійного впливу тварин на стресові ситуації або стресові подразники, що імітують стрес у повсякденному житті. Ця модель широко застосовується для вивчення нейробіологічних процесів, що опосередковують наслідки хронічного стресу [6]. Є лише декілька досліджень, які використовують цей тип моделі для вивчення змін біології яєчників після стресового впливу [7–9]. Наскільки нам відомо, жодне з цих досліджень не викликало типового фенотипу DOR і не досліджувало як резерв фолікулів яєчників, так і зміни гормонів сироватки, пов’язані з DOR.

Це дослідження було проведено з метою виявлення зміни фенотипу DOR у мишей C57BL/6 з використанням парадигми хронічного непередбачуваного стресу. Для підтвердження хронічного стресового ураження біологічних функцій яєчників також було представлено ряд змін репродуктивного гормону та факторів, пов'язаних з розвитком фолікулів. Коротке дослідження довгострокового впливу CUS на морфологію яєчників було проведено шляхом спарювання експериментів з гістологічним аналізом яєчників.

Матеріали і методи

Тварини

Самки мишей C57BL/6, які зазнали стресової парадигми, були у віці від 6 до 8 тижнів. Тридцять мишей були випадковим чином і порівну розділені на модельну групу та контрольну групу. Експеримент з парадигмою CUS повторювали тричі. Для оцінки рівня вагітності п’ятнадцяти тижневих самців мишей спарювали з самками мишей. Шлюбний експеримент повторювали двічі. Усі експериментальні процедури на тваринах були схвалені Експериментальним етичним комітетом на тваринах Університету Фудана. Масу тіла мишей з кожної групи вимірювали щотижня. Індекс ваги яєчників розраховували за такою формулою: індекс ваги яєчників = маса яєчників/маса тіла.

Хронічний непередбачуваний стрес (CUS)

Процедура CUS базувалась на попередніх звітах із невеликими змінами [10]. Два стресори вводили кожній моделі миші протягом восьми тижнів. Щоб уникнути толерантності, силу певних стресових факторів збільшували щотижня. Зокрема, стресори були такими: стриманий стрес, підвіска хвоста, виснажливе плавання, похитування орбіти, нахил клітини на 45 °, мокра постільна білизна, порожня клітка, шумовий стрес, спалах, соціальна ізоляція, соціальне скупчення людей, зсув темного світла, позбавлення їжі, та позбавлення води. Стресори випадково планували протягом тижня і повторювались протягом 8 тижнів. Позбавлення їжі або води та мокра підстилка застосовували, уникаючи сьомого дня кожного тижня, щоб запобігти відхиленню маси тіла. Ненапружених контрольних мишей розміщували в групах без втручання. Приклад тижневого розкладу CUS наведено в таблиці 1 в Додатковому матеріалі. Мишей приносили в жертву після 8-тижневого CUS. Відбір проб проводився з 8-10 ранку, коли кортикостерон у сироватці крові (CORT) знаходився на базовому рівні добових коливань.

Естрозний велосипед

Піхвові мазки брали щоранку протягом 3 тижнів перед жертвою для оцінки естрального циклу. Експеримент повторювали три рази з кожною копією, що містила по 6 мишей у кожній групі. Стадію естрального циклу визначали за допомогою світлового мікроскопічного аналізу переважного типу клітин у зразках вагінального мазка [11].

Аналіз на сироваткові гормони

Гормон сироватки вимірювали за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА), дотримуючись вказівок виробника. Комерційні набори ІФА використовувались для оцінки CORT, LH, FSH, анти-Мюллерового гормону (AMH), тестостерону (T) та E2. Для кожного аналізу в кожній групі було 6–12 зразків із трьома повторностями. Інформація про використані набори ІФА наведена в таблиці S2 в Додаткових матеріалах.

Серійний зріз яєчників та підрахунок фолікулів

Для гістологічного аналізу фіксовані яєчники вбудовували парафіном, послідовно розрізали та фарбували для підрахунку фолікулів на основі попередніх методів [12]. Загальну кількість фолікулів і жовтого тіла на яєчник розраховували шляхом додавання кількості кожного п'ятого зрізу по всьому яєчнику. Фолікули класифікували на чотири стадії відповідно до модифікованої системи Октая [13]. Підрахунок повторювали три рази з кожною копією, що містила 6–8 лівих яєчників від 6–8 мишей у кожній групі.

Шлюбні експерименти

Після 8 тижнів дії парадигми стресу для розведення було відібрано по десять самок мишей з кожної групи для оцінки їх плодючості. Самки мишей спарювались з самцями мишей C57BL/6 того ж віку протягом 1 тижня при співвідношенні 2: 1 на клітку. Після закінчення шлюбного періоду самок серійно зважували та обстежували на наявність ознак вагітності. Підраховано кількість мишей F1 у двох групах. Після відлучення материнських мишей приносили в жертву. Яєчники збирали та фіксували, як зазначено вище, та досліджували на гістологічні зміни. Експеримент повторювали два рази з кожною копією, що містила по 5 мишей у кожній групі.