Повний текст Клінічні та молекулярно-генетичні особливості Hb H та AE-Bart; s d TACG

Прийнято до публікації 10 лютого 2018 року

Опубліковано 3 квітня 2018 р. Том 2018: 11 стор. 23—30

Перевірено на наявність плагіату Так

Коментарі рецензентів 3

Редактор, який схвалив публікацію: Професор, доктор Мартін Х. Маурер

Chanchai Traivaree, 1, * Boonchai Boonyawat, 2, * Chalinee Monsereenusorn, 1 Piya Rujkijyanont, 1 Apichat Photia 1

1 відділення гематології/онкології, відділення педіатрії, лікарня Фрамонгкутклао та Медичний коледж, Бангкок, Таїланд; 2 Відділ генетики, Департамент педіатрії, лікарня Фрамонгкутклао та Медичний коледж, Бангкок, Таїланд

* Ці автори однаково сприяли цій роботі

Таласемія є найпоширенішим спадковим захворюванням крові в Південно-Східній Азії, яке викликане зниженим або відсутнім синтезом глобінових ланцюгів гемоглобіну, що призводить до дисбалансу ланцюгів глобіну. α-таласемія є одним з основних типів таласемії і зумовлена мутацією гена α1-глобіну (HBA1) або гена α2-глобіну (HBA2) на хромосомі 16. 1 Генетична мутація призводить до клінічних змінних залежно від зменшення або відсутності α-глобіновий ланцюг. У Таїланді найпоширенішим типом мутації гена α-глобіну є делеція двох генів α-глобіну (α-таласемія 1), спеціально названих делецією типу Південно-Східної Азії (SEA) (- SEA), з подальшою делецією одного α-глобін (α-таласемія 2), включаючи 3,7 kb або делецію вправо (-α 3,7) та 4,2 kb або делецію вліво (-α 4,2), відповідно. Найпоширенішою мутацією гена α-глобіну без делеції є Таїланд - гемоглобін постійної весни (Hb CS, αα CS). Гемоглобін E (Hb E), який є однією з найпоширеніших мутацій гена HBB у Південно-Східній Азії, може проявлятися як гемоглобінопатією, так і таласемічним фенотипом, пов'язаним з різними клінічними проявами.

Клінічний та гематологічний прояв α-таласемії варіюється, починаючи від тихого носія і закінчуючи смертельним синдромом гідропса феталісу Hb Барта. Взаємодія α-таласемії 1 і α-таласемії 2 спричинює хворобу гемоглобіну H (Hb H), а взаємодія хвороби Hb H з гетерозиготним Hb E призводить до хвороби А. Е. Барта. 2,3 Hb H характеризується двома основними формами, включаючи делеційні та неделеційні захворювання Hb H. Делеційна хвороба Hb H обумовлена комбінацією делеції, що видаляє обидва гени α-глобіну в одній хромосомі 16, і делецією, що видаляє лише один ген α-глобіну в іншій хромосомі 16. Неделеційна хвороба Hb H виникає в результаті комбінації делеції, що видаляє обидва Гени α-глобіну в одній хромосомі 16 та точкова мутація або невелика інсерція/делеція, що включає або ген HBA1, або HBA2 в іншій хромосомі 16. Кореляція між клінічними фенотипами, гематологічними параметрами, генотипами α-глобіну та лабораторними біомаркерами в різних популяціях були вивчені. 4–6

Метою цього дослідження було дослідити фенотипові прояви цих мутацій гена α-глобіну шляхом вивчення їх гематологічних показників, типу гемоглобіну, віку при появі, потреби у переливанні, віку та зросту як при Hb H, так і при формах α-таласемії хвороби AE Барта . Була представлена кореляція генотип – фенотип кожної мутації, включаючи лабораторні біомаркери та генетичні профілі у дітей із хворобою Hb H та хворобою А. Е. Барта, які лікуються у лікарні Phramongkutklao, центрі вищої допомоги хворим на таласемію в центральному Таїланді.

Пацієнти та методи

У цьому дослідженні брали участь сімдесят шість пацієнтів з α-таласемією, які проходили лікування в клініці гематології, відділення педіатрії лікарні Фрамонгкутклао, Бангкок, Таїланд. Письмова інформована згода та бланк згоди були отримані від усіх учасників, а також батьків чи опікунів дітей до зарахування до дослідження. Протокол дослідження був затверджений Інституційною комісією з лікарні Фрамонгкутклао та Медичного коледжу, Бангкок, Таїланд, дотримуючись етичних принципів Гельсінської декларації 1975 року та її перегляду. Критерії включення включають пацієнтів, у яких діагностовано хворобу Hb H та хворобу А. Е. Барта у віці ≤18 років та письмову інформовану згоду та згоду на участь у нашому дослідженні. Пацієнти, які мали неповні дані, включаючи гематологічні дані, гемоглобіновий тип та аналіз мутації генів α-глобіну, були виключені з дослідження.

Всього було включено 58 пацієнтів з хворобою Hb H та 18 з хворобою А. Е. Барта. Більшість пацієнтів походили з центральної частини Таїланду. Клінічно пацієнтів з α-таласемією класифікували на трансфузійно залежних та нетрансфузійних. Також пацієнтів обстежували на предмет показників росту. Пацієнтам з α-таласемією діагностували на основі віку при першій трансфузії, потреби у переливанні крові, фізичного обстеження, а також на основі тестів, що включають гематологічні дані, лабораторні біомаркери, гемоглобіновий типізатор та аналіз мутації генів α-глобіну. Повна клінічна історія була зареєстрована разом із параметрами росту. Гематологічні дані, лабораторні біомаркери та типізування гемоглобіну були отримані ретроспективно з медичної документації.

Гематологічні та біохімічні показники

Гематологічні аналізи проводили за допомогою автоматизованого гематологічного аналізатора Coulter HMX (Beckman Coulter Corporation, Маямі, Флорида, США). Профілі гемоглобіну та концентрації фетального гемоглобіну (HbF) визначали за допомогою капілярного електрофорезу (CE; система Minicap, Sebia, Parc Technologique Leonard de Vinci, Франція).

Всього було зібрано 76 зразків ЕДТА периферичної крові від усіх осіб. Геномну ДНК екстрагували з лімфоцитів периферичної крові за допомогою комерційно доступних наборів згідно з протоколом виробника. Проведено молекулярний аналіз на мутацію HBA1 та HBA2. 7,8 Коротше кажучи, мультиплексна ланцюгова реакція розриву-полімерази (ПЛР) вперше була використана для характеристики загальних делецій гена α-глобіну в популяціях Південно-Східної Азії, включаючи делецію α-таласемії 1 [SEA (- SEA) та THAI (- THAI) ] та α-таласемія 2 [3,7 kb (-α 3,7) та 4,2 kb (-α 4,2) видалення]; Мультиплексна ампліфікаційна рефрактерна мутаційна система була проведена для виявлення загальних неделеційних мутацій гена α-глобіну, включаючи Hb CS та гемоглобін Paksé (Hb PS); 9 та пряме ДНК-секвенування всіх кодуючих областей та меж екзону-інтрону обох генів було нарешті використано для виявлення невідомих мутацій гена α-глобіну без делеції. 10

Розрахункову кількість учасників розраховували, встановлюючи похибку α 0,05, поширеність 0,06 11 та встановлювали у 80 пацієнтів. Базові значення вибраних змінних розраховувались як середнє, медіана та середнє відповідно до процентилю. Розподіл кількісних змінних аналізували за допомогою критерію Шапіро – Вілка. Постійні змінні порівнювали між двома групами, використовуючи неспарений t-тест для даних з параметричним розподілом та тест Манна – Уітні для непараметричного розподілу. Тест Хі-квадрат та точний тест Фішера використовувались для аналізу категоріальних змінних для даних із параметричним розподілом та непараметричним розподілом відповідно. Для статистичного аналізу використовували Статистичний пакет для програм соціальних наук (SPSS) версії 23 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA), а також значення p 2 та 17,6 ± 3,8 кг/м 2 відповідно. Статистичних відмінностей у статі, середньому віці на момент встановлення діагнозу, вазі, зрості та ІМТ між пацієнтами із захворюваннями Hb H та пацієнтами з хворобою А. Е. Барта не було. Більшість пацієнтів із хворобою Hb H (55 пацієнтів; 94,8%) проживали в центральній частині Таїланду. Лише пацієнти з хворобою А. Е. Барта (5 пацієнтів; 27,8%) проживали на північному сході Таїланду.