Регуляторний ефект чемерину та терапевтична ефективність чемерину-9 при панкреатогенному діабеті

• Журнал Головна
• Поточне питання
• Майбутній випуск
• Найчитаніші
• Найчастіше цитовані (розміри)
  • Останні два роки
  • Разом
• Найчастіше цитовані (CrossRef)
  • Минулий рік 0
  • Разом
• Соц.медіа
  • Минулий місяць
  • Минулий рік
  • Разом
• Архів

• Інформація
• Онлайн подання
• Інформація для авторів
• Редагування мови
• Інформація для рецензентів
• Редакційна політика
• Редакційна колегія
• Цілі та сфера застосування
• Абстрагування та індексування
• Бібліографічна інформація
• Інформація для бібліотекарів
• Інформація для рекламодавців
• Передруки та дозволи
• Зверніться до редактора

• Загальна інформація
• Про Спандідос
• Конференції
• Вакансії
• Зв'язок
• Правила та умови

• Автори:
  • Цзяньфен Ту
  • Юе Ян
  • Цзинчжу Чжан
  • Готао Лу
  • Лу Ке
  • Чжихуй Тонг
  • Маймайтіцзян Касіму
  • Деджун Ху
  • Кюран Сюй
  • Вейцин Лі

• Ця стаття згадується в:

  Анотація

  Вступ

  Матеріали і методи

  Дослідження пацієнтів

  Пацієнти з T2DM (n = 110) або PDM (n = 113) були набрані в період з січня 2016 року по грудень 2019 року у відділ ендокринології та Центр важкого гострого панкреатиту (SAP) лікарні Jinling, медична школа Нанкінського університету. Зразки крові здорової популяції, які важко відібрати, не були включені, оскільки метою цього дослідження було дослідити роль хемерину-9 у ЦД. Пацієнтами з Т2ДМ було 69 чоловіків та 41 жінка середнього віку 48,6 ± 2,1 року. Пацієнтами з ПДМ було 82 чоловіки та 31 жінка середнім віком 45,3 ± 1,8 року. Діагноз T2DM або PDM був підтверджений відповідно до Експертного комітету з діагностики та класифікації цукрового діабету (12). Основною причиною PDM був або гострий, або хронічний панкреатит. Щоб оцінити зв'язок між рівнем хемерину та ІР-статусом, пацієнтів з T2DM або PDM додатково розділили на дві групи з (IR> 1) та без (IR≤1) IR, а зразки сироватки (10 мл) збирали для подальшого ІФА-аналіз. Письмова інформована згода на використання зразків сироватки була отримана від усіх пацієнтів, які брали участь у цьому дослідженні. Дослідження було схвалено Комітетом з етики лікарні Цзіньлін (Нанкін, Китай).

  

  ІФА аналіз

  Рівні хемерину в сироватці крові (ml063020 для мишей, ml058526 для людини) та сироваткової глюкози (ml057865 для мишей, ml063205 для людини) та інсуліну (DCM076-8) аналізували за допомогою набору ELISA від Shanghai Enzyme-Biotechnology Co., Ltd. IL-1 (SEA057Mu) та TNF-α (SEA133Mu) аналізували набори ELISA від Cloud-Clone Corp.

  Дослідження на тваринах

  Таблиця I.

  Склад нормальної (контрольної) дієти з високим вмістом жиру для мишей C57BL/6.

  Таблиця I.

  Склад нормальної (контрольної) дієти з високим вмістом жиру для мишей C57BL/6.

  Склад Звичайна їжа (%) Їжа з високим вмістом жиру (%)

  Крохмаль	52.4	0
  Сахароза	4.9	45,0
  Білок	18.9	23,0
  Жир	6.0	20,0
  Целюлоза	3.8	5.0
  Вітаміни	5.8	1.5
  Мінерали	8.2	5.5

  Для оцінки впливу агоніста CMKLR1, чемерину-9, на PDM, перитонеальні ін’єкції розчину фосфатного буфера (PBS, 200 мкл, контрольна група, n = 8) або хемерину-9 (4 мкг на 200 мкл PBS, n = 8 ) або проводились щодня протягом 42 днів, як описано раніше (17). Зразки крові відбирали на 0 і 42 день. Протоколи експериментів на тваринах in vivo були затверджені Комітетом з етики лікарні Цзіньлін (Нанкін, Китай).

  Екстракція РНК та зворотна транскрипція - кількісна ПЛР (RT-qPCR)

  Загальну РНК із зразків тканин голови підшлункової залози (40 мг) екстрагували за допомогою реагенту TRIzol ® (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), згідно з протоколом виробника. Згодом qPCR проводили із застосуванням суміші SYBR Green PCR Master, що включає зворотну транскриптазу, буфер, dNTP (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.), згідно з протоколом виробника. Термічний цикл RT-qPCR встановлювали таким чином: 95 ° C протягом 5 хв, 95 ° C протягом 10 секунд та 60 ° C протягом 20 секунд, повторюваного протягом 40 циклів. Грунтовки були отримані від компанії Tiangen Biotech. Для qPCR використовувались наступні пари праймерів: PDX1 прямий, 5′-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3 ′ і зворотний, 5′-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3 ′; GLUT2 вперед, 5′-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3 ′ і реверс, 5′-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3 ′; і β-актин вперед, 5′-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3 ′ і зворотний, 5′-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3 ′. Для аналізу відносної експресії мРНК використовували метод 2 ΔΔCq (18). β-актин використовували як внутрішній контрольний контроль. Відносні рівні мРНК нормалізували до внутрішнього еталонного гена β-актину.

  Фарбування H&E

  Тканини підшлункової залози фіксували у 10% розчині формаліну протягом 24 годин при кімнатній температурі та обробляли звичайним гістологічним препаратом тканин. Усі зразки були залиті у віск та розділені на 4 мкм. Зрізи фарбували гематоксиліном (0,5%, 5 хв при кімнатній температурі) та еозином (0,5%, 1 хв при кімнатній температурі) для патологічного гістологічного дослідження.

  Розрахунок FPG та інсуліну, розрахунок глюкози після їжі та гомеостатична модель інсулінорезистентності (HOMA-IR)

  Рівні глюкози та інсуліну вимірювали у мишей на 21 та 42 день після голодування протягом 16 год. Для глюкози після їжі голодним мишам вводили 1–1,5 мг/г глюкози, а зразки крові відбирали через 120 хв. Концентрації глюкози та інсуліну в сироватці крові визначали за допомогою аналізів ІФА. Після отримання рівнів глюкози та інсуліну натще HOMA-IR розраховували за такою формулою: HOMA-IR = [глюкоза натще (нмоль/л) × інсулін натще (мкЕ/л)]/22,5.

  Статистичний аналіз

  Статистичний аналіз проводили за допомогою програм SPSS версії 22.0 (IBM Corp.) та GraphPad Prism версії 5.0 (GraphPad Software, Inc.). Кількісні дані представлені як середнє значення ± SEM з принаймні трьома незалежними повтореннями. Статистичну значущість між групами визначали за допомогою t-критерію Стьюдента або одностороннього ANOVA з пост-hoc тестом Tukey HSD (Чесно значуща різниця). Р 1 демонстрував суттєво знижений рівень хемерину (Р 1 мав значно нижчий рівень хемерину порівняно з тими з ІК ≤1 (Р

  ---