Вагінальний мікробіцидний гель SR-2P забезпечує захист від вірусу простого герпесу 2 при введенні
Скотт А. Філдс
імунології та інфекційних хвороб, Відділ біологічних наук, SRI International, Менло-Парк, Каліфорнія, США
Гаурав Бхатія
b Фармацевтичні та хімічні технології, Відділ біологічних наук, SRI International, Менло-Парк, Каліфорнія, США
Джулі М. Фонг
імунології та інфекційних хвороб, Відділ біологічних наук, SRI International, Менло-Парк, Каліфорнія, США
Мінтао Лю
b Фармацевтичні та хімічні технології, Відділ біологічних наук, SRI International, Менло-Парк, Каліфорнія, США
Гіта Н. Шанкар
b Фармацевтичні та хімічні технології, Відділ біологічних наук, SRI International, Менло-Парк, Каліфорнія, США
Анотація
ВСТУП
Місцеві вагінальні мікробіциди проти вірусів, таких як ВІЛ та ВПГ-2, були оцінені в клінічних випробуваннях зі змішаними результатами. Такі кандидати, як ноноксинол-9, сульфат целюлози та C31G, не тільки не захистили від ВІЛ або ВПГ-2, але насправді призвели до підвищеного ризику зараження вірусами (16, –19). На відміну від цього, гель мікробіцидів тенофовіру забезпечив 31% захисту від ВІЛ та, на диво, показав захист від ВПГ-2 на 51% (20). Це було несподіваною перевагою, враховуючи, що тенофовір не демонстрував захисту в клітинних аналізах, але припускає, що in vivo тенофовір може бути подвійним противірусним терапевтичним засобом. В даний час ацикловір розглядається як вагінальний кандидат на мікробіциди (21), але, можливо, його доведеться застосовувати разом із тенофовіром, щоб бути ефективним як проти ВІЛ, так і проти ВПГ-2. Зовсім недавно клінічне випробування фази III лише гелю тенофовіру, де гель повинен був вводитися за 12 годин до сексу та через 12 годин після сексу, не показало жодної переваги порівняно з плацебо у захисті жінок від ВІЛ (http: // www. conrad.org/news-pressreleases-107.html). Здається, це пов’язано з відсутністю дотримання протоколу дослідження програми, яка проводиться двічі на день.
Ми розробляємо мультивірусний (ВПГ-2 та ВІЛ) вагінальний мікробіцидний гелевий препарат із застосуванням двокомпонентної системи. Один компонент - 10% ацикловіру (мас./Мас.), Суспендований у 2% (мас./Мас.) Розчині Pluronic F-127 (термореактивний полімер), а другий компонент - 2% тенофовіру (мас./Мас.), Суспендований у 2 % (мас./мас.) розчину Noveon AA-1 (полікарбофіл, що реагує на рН). Новизна цього препарату (іменованого тут SR-2P) полягає в тому, що два компоненти можуть бути змішані між собою перед введенням у вагінальну порожнину. Як тільки мікробіцид потрапляє у піхву, середовище з низьким рН у поєднанні із підвищенням температури, що забезпечується організмом, змушує суміш утворювати прилипаючий гель, який прилипає до вагінального епітелію (22, –24). Зв’язуючись із слизовою оболонкою піхви, ліки повільно викидаються в тканини, де віруси розмножуються.
Раніше ми продемонстрували, що антивірусна рецептура плацебо SR-2P добре переноситься на моделі роздратування піхви мишами (24) і що ацикловір і тенофовір потрапляли у вагінальні тканини на терапевтичних рівнях до 24 годин після лікування (G. Bhatia, SA Fields, JM Fong, M. Liu та GN Shankar, подані для публікації). Крім того, в попередніх дослідженнях ми продемонстрували ефективність SR-2P проти інфекції HSV-2 у мишей, де 30% мишей, попередньо оброблених SR-2P за 1 год до зараження, демонстрували виживання проти летального ураження вірусом (24). . Тут ми показуємо, що повторні або одноразові профілактичні дози SR-2P забезпечують граничний захист від ВПГ-2, тоді як режим прийому однієї дози протягом 10 днів після інфікування в поєднанні з профілактичною дозою забезпечує майже повний захист від вірусу у мишей.
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
Клітинні лінії та віруси.
Підготовка SR-2P.
Полоксамер 407 NF та ацикловір були придбані у Spectrum Chemicals Manufacturing Company (Гардена, Каліфорнія), тенофовір - у Ханчжоу Старшайн Фармасьютикал (Шанхай, Китай), а полікарбофіл USP отриманий у подарунок від Lubrizol (Wickliffe, OH, USA). SR-2P, що містить 5% ацикловіру та 1% тенофовіру, з консервантами та без них, готували, як описано раніше (24). Коротше кажучи, сполуки готували у водних розчинах, що містять полоксамер 407 NF (1,0% [мас./Мас.]) Та полікарбофіл USP (1,0% [мас./Мас.]). Тенофовір був включений із вмістом 2% (мас./Мас.) До компоненту полоксамера 407 NF, а ацикловір - із вмістом 10% (мас./Мас.) У складі полікарбофільного УСП. Окремі компоненти подавали у два окремі 10-мл шприци, шприци з’єднували, і два компоненти змішували шляхом натискання та втягування шприців до однорідності суміші. Комбінований SR-2P зберігали в одному шприці при 4 ° C протягом 5 днів перед використанням.
Тварини.
Усі експерименти на тваринах були розглянуті та схвалені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин (IACUC) при SRI International та проводились відповідно до відповідних керівних принципів та норм в установі, акредитованій Асоціацією з оцінки та акредитації лабораторних служб догляду за тваринами (AAALAC). ).
Визначення ID50 ВПГ-2 у мишей.
Самки мишей BALB/c були придбані в лабораторіях Harlan (Лівермор, Каліфорнія) і розміщені в мікроізоляторних клітках з підстилкою з твердих порід деревини; Чау-гриз Purina 5002 та вода, очищена зворотним осмосом, надавались за бажанням. Усі миші (віком від 7 до 9 тижнів) були гормонально синхронізовані з підшкірною дозою 3 мг медроксипрогестерону ацетату на день -8. Мишей рандомізували в групи лікування, що складалися з 10 мишей на групу в дослідженні, і їм вводили інтравагінально за допомогою кінчика піпетки p200 з 30 мкл акуратного вірусу або розведення 1: 5, розведення 1:25 або розведення 1: 125 вірусу. Мишей оцінювали на предмет зміни маси тіла та клінічних спостережень (почервоніння та набряк геніталій, виділення, скуйовджене хутро, зігнута постава або втрата функціональності кінцівки). Мишей, які втратили більше 20% від початкової маси тіла або виявили екстремальні клінічні симптоми, гуманно евтаназували і зарахували до смертних жертв наступного дня. Розведення нашого запасного вірусу 1: 5 (6,75 × 10 4 загальної БФ) призвело до повної летальності (дані не наведені) і було використано для всіх досліджень, описаних нижче.
Тестування ефективності SR-2P у мишей.
ТАБЛИЦЯ 1
Детальна інформація про план дослідження та групи лікування для експериментів з ефективністю SR-2P a
| Профілактичне дослідження | |||||
| 1 | Немає гелю/неінфікований | NT | NT | NT | NT |
| 2 | Плацебо | День 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | NT | NT |
| 3 | SR-2P | День 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | NT | NT |
| 4 | SR2-P | День -1 (за 24 год до зараження) | День 0 | NT | NT |
| 5 | SR-2P | День -2, день -1, день 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | NT | NT |
| Профілактичне/постекспозиційне дослідження | |||||
| 6 | Немає гелю/неінфікований | NT | День 0 | NT | NT |
| 7 | Немає гелю/зараженого | NT | День 0 | NT | NT |
| 8 | Плацебо | День -2, день -1, день 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | День 1 | День 2 - день 10, один раз на день |
| 9 | SR-2P | День -2, день -1, день 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | День 1 | День 2 - день 10, один раз на день |
| 10 | Плацебо | День 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | День 1 | День 2 - день 10, один раз на день |
| 11 | SR-2P | День 0 (за 1 год до зараження) | День 0 | День 1 | День 2 - день 10, один раз на день |