Виноградне борошно Шардоне покращує стеатоз печінки та резистентність до інсуліну через зміну

Партнерський коледж ветеринарної медицини, Університет Конкук, Хваян-дун, Кванджін-гу, Сеул, Південна Корея

Філія USDA, ARS, Олбані, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Партнерський коледж ветеринарної медицини, Університет Конкук, Хваян-дун, Кванджін-гу, Сеул, Південна Корея

Афілійований відділ продуктів харчування та харчування, Університет Ханьян, Вангсімні-ро, Сондун-гу, Сеул, Південна Корея

Філія USDA, ARS, Олбані, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Кун-Хо Сео,
Гленн Е. Бартлі,
Крістіна Там,
Хон-Сок Кім,
Дон Хьон Кім,
Юнг-Ван Чон,
Хюнсук Кім,
Уоллес Йокогама

Цифри

Анотація

Цитування: Seo K-H, Bartley GE, Tam C, Kim H-S, Kim D-H, Chon J-W та ін. (2016) Борошно виноградних кісточок Шардоне покращує стеатоз печінки та резистентність до інсуліну за допомогою зміненої експресії печінкового гена для окислювального стресу, запалення та синтезу ліпідів та керамідів у мишей із ожирінням, спричинених дієтою. PLoS ONE 11 (12): e0167680. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0167680

Редактор: Карлос М. Родрігес-Ортігоса, Університет Наварри, ІСПАНІЯ

Отримано: 8 квітня 2015 р .; Прийнято: 18 листопада 2016 р .; Опубліковано: 15 грудня 2016 року

Це стаття з відкритим доступом, вільна від авторських прав, і може бути вільно відтворена, розповсюджена, передана, модифікована, побудована або використана будь-ким в будь-яких законних цілях. Робота доступна під присвятою Creative Commons CC0 у відкритому доступі.

Наявність даних: Усі відповідні дані містяться в документі та супровідному інформаційному файлі.

Фінансування: Ця робота була підтримана грантом Національного дослідницького фонду Кореї (NRF), що фінансується урядом Кореї (MSIP) (No.2015R1A2A2A01005017) та частково грантом І етапу програми досліджень інновацій для малого бізнесу Національного інституту продовольства та сільського господарства (NIFA) ( NIFA/SBIR 2013-00549).

Конкуруючі інтереси: Автори заявили, що не існує конкуруючих інтересів.

Вступ

Безалкогольна жирова хвороба печінки (НАЖХП) визнана важливою проблемою громадського здоров'я. Поширеність НАЖХП становить 20-30% загального населення західних країн [1]. NAFLD варіюється від стеатозу (проста жирова печінка) до неалкогольного стеатогепатиту (NASH), стану, що збільшує печінкову захворюваність та смертність. Надмірне накопичення ліпідів у печінці, стрес, окислювальний та ендоплазматичний ретикулум (ER), запалення та резистентність до інсуліну є основними проявами прогресування цього захворювання. Хоча етіологія НАЖХП не до кінця зрозуміла, «гіпотеза про два удари» є загальновизнаною [2]. У цій гіпотезі надмірне накопичення печінкових ліпідів супроводжується посиленням окисного стресу та запалення, що призводить до пошкодження печінки.

Більшість досліджень щодо сприятливого впливу виноградних кісточок на НАЖХП проводились із використанням водних або спиртових поліфенольних екстрактів виноградних кісточок [14–17]. Останнім часом увага до користі для здоров’я флавоноїдів у виноградних продуктах розширилася на виноградні кісточки винограду, побічний продукт процесу виноробства. Цілі кісточки винограду можуть містити значну кількість невитяжних фенольних сполук, що сприяють їх біологічній активності. Виноградні кісточки містять дві третини витяжних флавоноїдів винограду і мають найвищі концентрації найпоширеніших флавоноїдів, флаван-3-олів (флаванолів). Флаваноли включають катехін, епікатехін, їх 3-О-галати та (епі) катехінові димери, олігомери та полімери. Мономерний (епі) катехін легко всмоктується тонкою кишкою. Олігомери та полімери не всмоктуються, але їх метаболіти фенольної кислоти, що виробляються кишковими бактеріями, поглинаються.

Матеріали і методи

Тварини та дієти

Колекція плазми та печінки

Мишей позбавляли корму протягом 12 год і знеболювали випарником (VetEquip, Лівермор, Каліфорнія) 4% ізофлураном (Phoenix Pharmaceutical, Сент-Джозеф, Міссурі, США) та витратою кисню 1 л/хв в індукційній камері. У лежачих тварин підтримували 2–4% ізофлурану через носовий конус, а кров відбирали шляхом серцевої пункції шприцами, попередньо промитими розчином калію ЕДТА (15% мас./Об.). Пізніше печінку та жирові тканини епідидиму збирали, зважували та негайно заморожували у рідкому азоті для подальшого аналізу. Плазму відокремлювали після центрифугування при 2000 × g протягом 30 хв при 4 ° C.

Загальний вміст ліпідів у печінці

Після сублімаційного висихання порошкоподібні печінки зважували і змішували з 2 мл CHCl3/MeOH (2: 1), обробляли ультразвуком протягом 5 хв і інкубували протягом ночі. Зразки центрифугували протягом 10 хв при 1000 об/хв і супернатанти видаляли. Ще 2 мл CHCl3/MeOH додавали перед обробкою ультразвуком і витримували всю ніч для екстракції. З комбінованих екстрактів під азотом видаляли розчинник, а загальний вміст ліпідів у печінці визначали гравіметрично.

Видобутий вміст флавоноїдів

Зразок 0,2 г екстрагували 20 мл метанолу протягом 30 хв з струшуванням з подальшим обробкою ультразвуком та центрифугуванням. Супернатанти піддавали високоефективній рідинній хроматографії (ВЕРХ) та загальному фенольному аналізу. Загальний вміст фенолів та флавоноїдних сполук аналізували за допомогою Фолін-Ціокальтеу та стандартних методів ВЕРХ відповідно, як описано раніше [20].

Аналіз ліпідів у плазмі крові

Холестерин ліпопротеїдів у плазмі крові визначали методом ексклюзивної хроматографії, як описано раніше [21]. ВЕРХ проводили з використанням хроматографа ВЕРХ Agilent 1100 з колоною ВЕРХ Superose 6HR (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, NJ, USA), що складається із змішувальної котушки (1615–50 Бодман, Астон, Пенсільванія, США) у воді з контрольованою температурою. куртка (Aura Industrials, Staten, NY, США). Насос ВЕРХ Hewlett-Packard (79851-A; Agilent Technologies, Пало-Альто, Каліфорнія, США) був використаний для доставки холестеринового реагенту (Roche Diagnostics, штат Індіанаполіс, США, США) зі швидкістю потоку 0,2 мл/хв. Для калібрування сигналів на основі пікових площ використовували стандарти ліпопротеїну бичачого холестерину.