Вплив 8-тижневої дієтичної добавки мікроелементів на експресію генів в елітному гандболі

Співпрацювали в цій роботі з: Хорхе Моліна-Лопес, Марією Антонієтою Квіспе Рікальде, Базіліо Вальядаресом Ернандесом, Оленою Планеллс

Ролі Концептуалізація, курація даних, формальний аналіз, дослідження, методологія, написання - оригінальний проект, написання - огляд та редагування

Філіалістичний факультет, Фармацевтичний факультет, Університет Гранади, Гранада, Іспанія, Інститут харчування та харчових технологій, Центр біомедичних досліджень, Технологічний парк наук про здоров'я, Університет Гранади, Гранада, Іспанія

Ролі Концептуалізація, курація даних, дослідження, методологія, ресурси, написання - оригінальний проект, написання - огляд та редагування

Інститут тропічних хвороб та охорони здоров'я Канарських островів, Університет Ла-Лагуна, Ла-Лагуна, Тенеріфе, Канарські острови, Іспанія

Дослідження ролей, методологія, ресурси, нагляд, написання - огляд та редагування

Ролі Збір даних, Формальний аналіз

Authors ‡ Ці автори також внесли однаковий внесок у цю роботу.

Підрозділ соціальних досліджень оборони, Генеральний технічний секретар, Міністерство оборони, Мадрид, Іспанія

Ролі Збір даних, Формальний аналіз

Authors ‡ Ці автори також внесли однаковий внесок у цю роботу.

Афілійоване управління статистики. Факультет соціально-правових наук Університету Карлоса III, Хетафе, Мадрид, Іспанія

Дослідження ролей, методологія, ресурси, написання - оригінальний проект, написання - огляд та редагування

Хорхе Моліна-Лопес,
Марія Антонієта Квіспе Рікальде,
Базіліо Вальядарес Ернандес,
Антоніо Планеллс,
Роберто Отеро,
Олена Планеллс

Цифри

Анотація

Призначення

Було проведено дослідження змін у експресії генів у елітних гандбольних спортсменів, порівняно модуляцію генів до, після та за відсутності 8-тижневого втручання з полівітамінами/мінеральними добавками.

Методи

Було включено 13 елітних гандбольних спортсменів (у віці 22,9 ± 2,7 року) та 13 сидячих контролерів (у віці 20,9 ± 2,8 років). Було встановлено три часові точки: T0 (базові умови); Т8 (після 8 тижнів прийому добавок полівітамінним/мінеральним комплексом); і Т16 (через 8 тижнів за відсутності добавок). Експресію загальної кількості 112 генів оцінювали за допомогою RT-qPCR-аналізу за допомогою ПЛР-системи QuantStudioTM 12K Flex у реальному часі.

Результати

Аналіз виявив різні профілі генної регуляції генів, залучених до клітинної комунікації, енергетичного обміну клітин, запалення та імунної системи, окисного стресу та функції м'язів у спортсменів порівняно з сидячим контролем в умовах спокою (регульовані гени: розмір ефекту = великий, ƞ2 = 1,011 до 1.398, с Таблиця 1. Зміст щотижневих тренувань у гандболістів.

Критеріями включення були: проходження медичного обстеження набору, яке складалося з клінічного обстеження, оцінки історії хвороби, статусу некурця та відсутності вживання ліків. Критеріями виключення були: споживання будь-яких харчових добавок за 6 тижнів до і під час дослідження, а також відсутність бажання брати участь у дослідженні. Дослідження було схвалено Комітетом з етики Університету Гранади та проведено відповідно до Гельсінкської декларації. Ціль дослідження та можливі ризики та дискомфорт були пояснені учасникам до отримання їх письмової згоди. Дослідження було зареєстровано в Національному інституті охорони здоров’я США (ClinicalTrials.gov) NCT03672786. Назва: Експресія генів у втручаються спортсменів.

Експериментальний дизайн

SED = сидячий контроль; РУКА = Елітні гандболісти.

Характеристика учасника

Забір крові та виділення та кількісне визначення РНК

Учасники звітували в лабораторію в понеділок вранці між 8:00 та 10:00 після утримання від фізичних вправ принаймні протягом 24 годин. Після періоду спокою в лежачому положенні 10 хвилин, зразки венозної крові відбирали з антекубітальної вени за допомогою стандартних методик. Зокрема, зразки збирали у спеціальні пробірки (проби РНК крові РАХген, Бектон Дікінсон, Німеччина) для визначення експресії РНК і зберігали при -80 ° C до аналізу.

РНК-пробірки крові PAXgene інкубували протягом двох годин при кімнатній температурі, щоб досягти повного лізису клітин крові. Потім 2,5 мл цільної крові людини в пробірках РНК крові PAXgene центрифугували протягом 10 хвилин при 5000 g. Після центрифугування надосадову рідину викидали і гранулу промивали 4 мл води без РНКази, перемішували на вихрі і центрифугували протягом 10 хвилин при 5000 g. Після промивання гранулу розчиняли у 350 мкл ресуспендованого буфера та інкубували з 300 мкл зв’язуючого буфера та 40 мкл протеїнази К протягом 10 хв при 55 ° С у шейкер-інкубаторі. Лізат переносили у колонку для подрібнення PAXgene і центрифугували при 18000 g протягом трьох хвилин. Проточну фракцію змішували з 350 мкл етанолу і переносили у спінову колонку РНК PAXgene. Після промивання колонки промивним буфером 1 зразки інкубували з 10 мкл ДНКази I протягом 15 хвилин. Спінові колонки PAXgene РНК промивали промивним буфером і РНК елюювали 40 мкл буфера елюції. Ефективність лікування ДНКазою оцінювали в RT-негативних зразках.

Вихід РНК оцінювали шляхом вимірювання поглинання при 260 нм у спектрофотометрі NanoDrop ND-1000 (Thermo Fisher Scientific). Чистоту РНК розраховували із співвідношення поглинання при 260 нм та 280 нм. Співвідношення OD 260/280 становило від 1,9 до 2,2 для всіх зразків. Цілісність РНК оцінювали за допомогою наноаналізу Eukaryote Total RNA Nano на біоаналізаторі Agilent 2100 (Agilent Technologies). Якість РНК оцінювали відповідно до числа цілісності РНК (RIN), використовуючи 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies). Зразки високої якості (RIN ≥ 9) та стандартні зразки якості (RIN = 7) були включені в дослідження для забезпечення більш реалістичного підходу.