Вплив екстракту сливи на скелетну систему плодових та новонароджених мишей - FullText - Medical
Відділ біології Коледжу наук
Поштова скринька 71454, Шираз (Іран)
Статті, пов’язані з "
- Електронна пошта
Анотація
Завдання: Для оцінки ефекту Prunus domestica Екстракти Л. на плодах та скелетних системах новонароджених. Матеріали і методи: Всього 32 вагітних мишей (Mus musculus) отримали гідроалкогольний екстракт транспортного засобу та сливи у гестаційні дні 1-18 та протягом усього терміну вагітності, а також 10 днів після пологів відповідно. Всього 30 не вагітних мишей годували сливовим спиртовим екстрактом сливи та екстрактом сливового соку протягом 30 днів. Вимірювали вміст кальцію в кістках та сироваткові концентрації кальцію, магнію та лужної фосфатази. Скелетні системи їхніх плодів та новонароджених забарвлювались у синій альціановий та червоний алізариновий S, вимірювали довжину стегнової кістки, гомілки та центр їх окостеніння. Результати: Довжина корінця у новонароджених мишей у матерів, які отримували екстракт сливи (4,61 ± 0,25 мм), була вищою порівняно з контрольною групою (4,48 ± 0,31 мм, р = 0,001), а індекс остеогенезу стегнової кістки новонароджених мишей у матерів, які отримували екстракт сливи також був вищим (0,87 ± 0,09) порівняно з контрольною групою (0,81 ± 0,06, р = 0,007). Висновок: Результати показали, що вагітні миші, які отримували екстракт сливи, мали плоди та новонароджених мишей з більш високим індексом остеогенезу, ніж у контрольних груп.
Вступ
Слива - це кісточкове плодове дерево, що належить до роду Прунус і підрод Прунус. Результати останніх досліджень показали, що сушена слива, чорнослив (Prunus domestica L.), може бути ефективним як для попередження, так і для зменшення втрати кісткової маси [1,2,3].
Методи та матеріали
Підготовка екстракту
P. domestica Плоди L. збирали з Сепідану, міста, розташованого в провінції Фарс, Іран. Загалом із 1000 г свіжої сливи було витягнуто 150 г сухої сливи. Гідроалкогольний екстракт готували методом перколяції та пюрирували за допомогою ексикатору. Також фруктовий сік із 1000 г свіжої сливи конденсували до 400 мл на водяній бані з температурою 60 ° C.
Управління тваринами та екстрактами
Для дослідження було використано 32 самки мишей вагою від 30 до 40 г, отримані з Будинку тварин, Університет медичних наук Шираз, Шираз, Іран. Тварин пристосовували до лабораторних умов за 2 тижні до початку експериментів. Мишей утримували при контрольованій кімнатній температурі 22-24 ° C зі світлом: темний цикл 12:12 год (світло вмикається о 09.00 год. І вимикається о 21.00 год.). Миші мали вільний доступ до їжі та водопровідної води. Експерименти на тваринах були схвалені Інституційним комітетом з питань етики та охорони здоров’я тварин, Департамент біології, Університет Шираз. Самки мишей потрапляли в клітку з самцями мишей, а запліднення перевіряли наступного ранку, перевіряючи наявність копуляційної пробки у піхві. День, коли спостерігали вагінальну пробку, був позначений як 0 день вагітності (день вагітності 0, GD 0). Вагітним мишам зважували на таких GD: 5, 8, 12 і 15. Схематичне зображення експериментальної процедури наведено на рисунку 1.
Рис. 1
Схематичне зображення експериментальної процедури.
Вагітних мишей розділили на дві експериментальні та дві контрольні групи (n = 8). Мишам першої експериментальної групи перорально давали 1,6 г/кг сливового спиртового екстракту сливи (РНЕ) від GD від 1 до 18. Мишей другої експериментальної групи лікували тією ж дозою протягом усього терміну вагітності, а також 10 днів після пологів.
Для порівняння невагітних та вагітних мишей, невагітних самок мишей вагою від 30 до 40 г розділили на експериментальну та контрольну групи (n = 10), оброблених PHE (1,6 г/кг). Також невагітних мишей (n = 10) обробляли екстрактом сливового соку (PJE, 8 мл/кг) для порівняння ефекту цих екстрактів. Екстракти суспендували в 0,2 мл дистильованої води і вводили експериментальним групам перорально голкою протягом 30 днів. Контрольні групи отримували 0,2 мл дистильованої води за умов, подібних до інших груп. Мишей зважували щотижня.
Вимірювання індексу остеогенезу
Плоди групи PHE на GD 19 та новонароджені на 10-й день після пологів були принесені в жертву під глибоким наркозом. Вимірювали довжину та масу їх тілець. Шістдесят один плід та 40 новонароджених були зафіксовані в 95% етанолі, а потім з них зняли шкіру та випотрошили. Їх знежирювали в ацетоні протягом 3 днів при 37 ° С і фарбували сумішшю синього алкіану (Merck, Дармштадт, Німеччина) та азаринового червоного S (Рідель-де-Хаен, Німеччина). Тварин очищали серією зменшуваних концентрацій гідроксиду калію в гліцерині, а потім утримували в гліцерині. Хрящовий скелет забарвлювався синім барвником, а окостенілий скелет - червоним. Загальну довжину стегнової і гомілкової кісток та довжину їх окостенілих зон вимірювали під стереомікроскопом, обладнаним окуляром, що управляється (Zeiss, Mc-80; Jena, Німеччина). Індекс остеогенезу розраховували діленням закостенілої довжини на загальну довжину кожної кістки (рис. 2).
Рис.2
Вплив екстрактів сливи на очищений скелет новонародженого, пофарбований азариновим червоним S та алкиановим синім. Хрящова та кісткова частини скелета забарвлені відповідно в синій та червоний кольори. Миші, оброблені PHE (ліворуч), були довшими, ніж контрольні миші (праворуч).
Вимірювання вмісту кальцію
В кінці експерименту вагітних і не вагітних мишей приносили в жертву під глибоким наркозом і розтинали стегна. Потім стегнові кістки видалили та очистили. Кістки сушили протягом 24 год в інкубаторі при 56 ° С. Висушені кістки випрашували при 550 ° C протягом 20 год у печі (модель 10500, Thermolyne, Dubuque, Айова, США). Кістку порошкоподібною і 0,03 г порошку розчиняли в 250 мкл HCl; цей розчин потім розбавляли 31 мл дистильованої води. Готували стандартні розчини, які містили 0,2 г CaCl2 у 2% HCl (щільність 720 ppm). Вихідні розчини розбавляли до 0,03 ppm. Вміст кальцію (Са) вимірювали за допомогою полум'яного фотометра (модель 8515, Jenway, Stone, Staffs, Великобританія). Рівняння лінійної придатності розраховували за допомогою Microsoft Excel (Microsoft Corp., Redmond, Wash., USA) як y = 0,0073x + 0,0624 де y - вміст Са в кістці, а х - вміст Са в стандартному розчині.