Взаємозв’язок розміру сальникової та підшкірної адипоцитів з метаболічною хворобою при важкому ожирінні

Дослідницька група з питань ожиріння, Центр освіти та досліджень, Університетська лікарня Сент-Вінсент, Дублін, Ірландія

Афілійований відділ ендокринології, лікарня Крайстчерча, Крайстчерч, Нова Зеландія

Партнерський відділ патології Університетської лікарні Сент-Вінсент та лікарні Св. Коламсілла, Дублін, Ірландія

Партнерський відділ хірургії, Університетська лікарня Сент-Вінсент та лікарня Сент-Коламсілл, Дублін, Ірландія

Відділення трансплантації печінки, Університетська лікарня Сент-Вінсент, Дублін, Ірландія

Партнерська школа біохімії та імунології, Трініті-коледж, Дублін, Ірландія

Дослідницька група з питань ожиріння, Центр освіти та досліджень, Університетська лікарня Сент-Вінсент, Дублін, Ірландія, Департамент ендокринології, Університетська лікарня Сент-Вінсент та Лікарня Сент-Коламсілл, Дублін, Ірландія

Жан О'Коннелл,
Лідія Лінч,
Том Дж. Кавуд,
Анна Квасник,
Ніамх Нолан,
Джастін Джогеган,
Ейден Маккормік,
Кліона О'Фарреллі,
Донал О'Ші

Цифри

Анотація

Об’єктивна

У кількох дослідженнях повідомляється про існування підгрупи осіб із ожирінням з нормальними метаболічними профілями. Залишається незрозумілим, які фактори відповідають за це явище. Ми припустили, що розмір адипоцитів може бути ключовим фактором у захисті метаболічно здорових людей із ожирінням (MHO) від несприятливих наслідків ожиріння.

Предмети

Тридцять п’ять пацієнтів, які перенесли баріатричну операцію, були класифіковані як MHO (n = 15) або страждають ожирінням, що страждає метаболізмом (MUO, n = 20), відповідно до меж, визначених Міжнародною федерацією діабету щодо метаболічного синдрому. Середній індекс маси тіла (ІМТ) становив 48 (діапазон 40–71).

Результати

Існувала помірна кореляція між розміром адипоцитів сальних залоз та розміром підшкірних адипоцитів (r = 0,59, p 40, найбільш швидкозростаюча категорія ожиріння [19]. Таким чином, метою цього дослідження було визначити, чи є розмір адипоцитів одним із факторів, пов’язаних з з фенотипом MHO при важкому ожирінні. Ми також досліджували взаємозв'язок між розміром адипоцитів та ступенем НАЖХП у цих суб'єктів.

Методи

Заява про етику

Комітет з етики університетської лікарні Сент-Вінсент схвалив це дослідження. Письмова інформована згода була отримана від кожного учасника до початку будь-якої дослідницької діяльності.

Предмети

Ми вивчили 48 послідовних пацієнтів з важким ожирінням, які перенесли баріатричну операцію. Усі пацієнти відвідували службу контролю ваги принаймні 1 рік до операції. За цей час їх зважували щомісяця. Пацієнти були виключені з дослідження, якщо вони мали значну втрату ваги протягом попередніх 6 місяців (n = 4), або якщо вони приймали ліки, які можуть вплинути на метаболічні та/або печінкові параметри (n = 9). Ми отримали зразки крові та сальної жирової тканини від решти 35 суб'єктів. Дев'ятнадцять із 35 суб'єктів дали згоду на взяття проб підшкірної жирової тканини. Що стосується віку, ІМТ та метаболічних показників, то між групою, яка погодилась на біопсію, не було суттєвої різниці від тих, хто цього не зробив. Середній вік становив 42 ± 7 років, середня вага - 150 кг (діапазон 103–240), а середній ІМТ - 48 кгм −2 (діапазон 40–71). Було 10 чоловіків і 25 жінок. П'ятнадцять пацієнтів були класифіковані як метаболічно здорові ожиріння, виходячи з їх метаболічного профілю, як детально описано нижче. Шість із 20 нездорових пацієнтів мали діабет 2 типу (ЦД2).

Визначення здорових людей, що страждають ожирінням, метаболічно

У метаболічно здорових людей із ожирінням (MHO) не було анамнезу серцево-судинних, респіраторних та метаболічних захворювань. Вони не застосовували жодних гіполіпідемічних, антигіпертензивних або гіпоглікемічних засобів. Клінічне обстеження було нічим не примітним, а стан щитовидної залози - нормальним. Рівень глюкози натще становив ≤5,6 ммоль/л, артеріальний тиск ≤135/85, а співвідношення холестерину TGL/HDL ≤1,65 (чоловіки) або ≤1,32 (жінки). Ці граничні точки були адаптовані з консенсусної дефініції Міжнародної федерації діабету щодо метаболічного синдрому, 2006 р. Використовували коефіцієнт концентрації холестерину тригліцеридів/ліпопротеїнів високої щільності, оскільки було показано, що це забезпечує простий засіб виявлення резистентності до інсуліну., пацієнти з дисліпідемією, які, ймовірно, мають підвищений ризик серцево-судинних захворювань [20]. Нездорові з ожирінням (MUO) метаболічно визначались через невідповідність принаймні одному з вищезазначених критеріїв.

Зразки жирової тканини та визначення розміру адипоцитів

Під час баріатричної хірургії було отримано приблизно 10–30 г жирової тканини сальникової тканини, або 5–10 г жирової підшкірної жирової клітковини. Шматок цієї тканини негайно фіксували у формаліні перед монтажем парафіну та підготовкою предметних стекол. Решту тканини поміщали в тепле середовище DMEM-F12, додавали 10% FCS, транспортували до лабораторії та обробляли протягом 1 години. Розмір адипоцитів оцінювали 2 методами.

Метод I (n = 35): Цифрові мікрофотографії слайдів H&E аналізували за допомогою програмного забезпечення UTHSCA Image Tool (Науковий центр охорони здоров’я Техаського університету). Два індивідуальні оператори розрахували максимальний діаметр 100 сусідніх адипоцитів з кожної з 4 окремих фотографій. Ці дані були передані в програму Excel для розрахунку середнього діаметра адипоцитів та стандартного відхилення для кожного зразка. Обидва оператори були засліплені клінічними деталями пацієнтів.

Метод II (n = 10): Свіжі зразки жирової тканини інкубували в колагеназі та середовищі DMEM-F12 (1 мг/мл колагенази типу II (Sigma C-6885)) протягом 60 хвилин у метаболічному шейкері (60–80 ударів/хв) при 37 ° C. Суспензію клітин фільтрували через сітку Nitex 250 мкм і промивали 3 рази в теплому середовищі - клітинам давали можливість плавати під дією сили тяжіння і інфраранант видаляли за допомогою шприца та 18 г голки перед додаванням свіжого середовища, обережно перевертаючи контейнер кожного разу для забезпечення рівномірної підвіски. Аліквоту 50 мкл клітинної фракції (суспендованої в середовищі) розбавляли 100 мкл середовища та 50 мкл трипанового синього (0,4% у H2O). Десять мкл цього розчину переносили в камеру Нойбауера, робили цифрові фотографії та вимірювали середній діаметр адипоцитів, розрахований, як зазначено вище.