Вживання натрію, але не ниркових нервів, послаблює ниркові венозні зміни, спричинені венозним тиском

Нефрологічний відділ, Медичний факультет, Університет Альберти, Едмонтон, Альберта, Канада

Кафедра фізіології, Університет Альберти, Едмонтон, Альберта, Канада

Нефрологічний відділ, Медичний факультет, Університет Альберти, Едмонтон, Альберта, Канада

Біомедична фізіологія та кінезіологія, Університет Саймона Фрейзера, Бернабі, Британська Колумбія, Канада

Нефрологічний відділ, Медичний факультет, Університет Альберти, Едмонтон, Альберта, Канада

Кафедра фізіології, Університет Альберти, Едмонтон, Альберта, Канада

Адреса для запитів на передрук та іншої кореспонденції: B. Braam, Univ. лікарні Альберти, кафедра медицини/Див. Нефрологія та імунологія, 11-132 CSB Clinical Sciences Bldg., Edmonton, AB T6G 2G3, Канада (e-mail: [email protected]).

Анотація

Підвищення центрального венозного тиску та ниркового венозного тиску (RVP) пов'язані з погіршенням функції нирок при гострому загостренні застійної серцевої недостатності. Ми перевірили, чи гостре ізольоване підвищення рівня RVP в одній нирці призводить до іпсилатеральної вазоконстрикції нирок та зниження швидкості клубочкової фільтрації (ШКФ), і чи залежить це від вживання харчової солі або активації ниркових нервів. Самці щурів Льюїса отримували звичайну (1% NaCl, NS) або високосолену (6% NaCl) дієту протягом ≥14 днів до гострого експерименту. Потім щурів рандомізували на наступні три групи: контроль часу та підвищення рівня RVP до 10 або 20 мм рт. Ст. Для оцінки частоти серцевих скорочень, ниркового кровотоку (RBF) та ШКФ. Для збільшення RVP ліва ниркова вена була частково закупорена протягом 120 хв. Для визначення ролі ниркових нервів проводили хірургічну денервацію у щурів на обох дієтах. Активність ниркових симпатичних нервів (RSNA) додатково реєстрували в окремій групі щурів. Збільшення RVP до 20 мм рт.ст. знижує іпсилатеральний RBF (7,5 ± 0,4-4,1 ± 0,7 мл/хв., −1 · мм рт. Ст. −1,

Рис. 1.Блок-схема експериментальної групової організації дослідження.

Підготовка

Ниркові гемодинамічні експерименти.

Після лапаротомії середньої лінії оголили ліву нирку. Ліву вену надниркових залоз або надшерстну вену канюлювали (Micro-Renathane MRE-025; Braintree Scientific, Braintree, MA), і канюлю просували до тих пір, поки кінчик не впирався в основну ниркову вену для прямого вимірювання RVP. Пролен довжиною 3–0 (Джонсон-Джонсон, Сан-Лоренцо, Пуерто-Рико) прослизали навколо лівої ниркової вени в місці її з’єднання з нижньою порожнистою веною і обшивали невеликим шматочком труби PE-90 для створення слінгу. Щоб збільшити RVP, стропу натягнули, щоб звузити ниркову вену. Зонд для потоку часу транзиту 1RB був розміщений навколо лівої ниркової артерії для прямого вимірювання RBF (Transonic, Ithaca, NY). Лівий сечовід був катетеризований для збору сечі (PE-10; BD Intramedic). Щур отримував додаткові рідини під час хірургічної підготовки [5% бичачий сироватковий альбумін (BSA), A7906; Sigma, Oakville, ON] з 250 мкг/хв FITC-інуліну (Sigma) при 1,5 мл/год. Ця інфузія продовжувалась протягом експерименту з 1% BSA з 250 мкг/хв FITC інуліну при 1,5 мл/год.

Ниркова денервація.

Щурів готували, як описано, за винятком того, що ниркові нерви, що курсували уздовж лівої та правої ниркових судин, були хірургічно видалені, а ниркові судини забарвлені 10% фенолом у 70% етанолі.

Нирково-симпатична нервова діяльність.

Експериментальний дизайн

Після завершення хірургічного інструментарію щурів стабілізували протягом 60 хв. Базові дані збирали протягом 60 хв, після чого RVP селективно підвищували до 10 або 20 мм рт. Ст. Шляхом поступового звуження лівої ниркової вени або не маніпулювали (контроль часу). Збір даних тривав ще 120 хв. Для гемодинамічних експериментів зразки крові (200 мкл) отримували на початку базового періоду та кожні 60 хв після цього. Зразки сечі, відкладені за часом, збирали кожні 30 хв. Під час експериментів з реєстрацією нервів не проводилось забору крові та сечі.

Аналітичні методи

Для визначення ШКФ за допомогою FITC-інуліну зразки плазми та сечі розводили у 0,5 моль/л HEPES (рН 7,4) для підтримки фізіологічного рН. Для завантаження по 50 мкл кожного розчину в двох примірниках використовували чорну пластину з 96 лунками (Greiner, Monroe, NC). Флуоресценцію визначали за допомогою флуорометра Fluoroskan Ascent Microplate Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Вантаа, Фінляндія) при довжині хвилі збудження 485 нм та довжині хвилі випромінювання 527 нм. Кінцеві зразки крові отримували із стегнового катетера для вимірювання рівня реніну в плазмі крові методом ІФА (NOVATEINBIO, Кембридж, Массачусетс).

Для визначення RSNA загальну кількість спайків над фоном визначали кількісно за допомогою програмного забезпечення Spike Histogram (лабораторна діаграма 8; ADInstruments). Шість вимірювань було проведено протягом базового періоду запису та усереднено. Вимірювання проводили з інтервалом у 5 хвилин протягом перших 30 хвилин збільшення RVP та з інтервалом у 30 хвилин після цього. Кількісна оцінка відповіді RSNA на підвищений RVP була розрахована як відсоток зміни RSNA від вихідного рівня.

Аналіз та статистика

Дані представлені у середньому за 30-хвилинні інтервали поспіль. Базову характеристику порівнювали як інтактних, так і денервованих щурів на нормальному харчуванні та дієті з ГС, використовуючи загальну лінійну модель багатоваріантності (MANOVA) з тестом Bonferroni post hoc. Для оцінки впливу підвищеного рівня RVP використовували багаторазову лінійну модель з повторним вимірюванням для порівняння кожної точки часу трьох груп як знежирених, так і інтактних тварин на різні дієти, використовуючи Бонферроні як пост hoc тест. Рівні реніну та альдостерону в плазмі крові аналізували за допомогою одностороннього аналізу ANOVA за допомогою пост-тесту Student-Newman-Keuls. Дані були перетворені в журнал або ранжировані, якщо вони зазвичай не розподілялись. Дані RSNA аналізували за допомогою двостороннього повторного вимірювання ANOVA за допомогою пост-тесту Student-Newman-Keuls. Дані аналізували за допомогою SPSS 24 (IBM, Armonk, NY) та SigmaPlot 13 (Systat, Сан-Хосе, Каліфорнія). Статистичне значення було прийнято на