Застосування FRET у біології; Новини-Медичні

Резонансний перенос енергії флуоресценції (FRET) - це механізм передачі енергії, який широко використовується в біологічних експериментах, таких як дослідження молекулярної структури. Його часто називають "спектроскопічною лінійкою" через його природу, коли відстань між двома флуорофорами визначається як відношення інтенсивності флуоресценції.

застосування

Кредит: Міха Вебер/Shutterstock.com

Застосування біологічних молекул FRET вважається неминучим, оскільки його вимірювання є дуже чутливими на відстанях у нанометровому масштабі. Вимірювання FRET можна проводити лише з чутливістю до однієї молекули, оскільки воно базується на флуоресцентній техніці вимірювання.

Застосування FRET у виявленні гібридизації ДНК

Застосування FRET у гібридизації зондів ДНК посилює гібридизацію у двох аспектах.

  1. Сигнал від зондів, які не прореагували, згасає, коли гібридизація проводиться на основі FRET. Це дозволяє уникнути необхідності процедур промивання та твердої опори, коли реакція гібридизації спостерігається в режимі реального часу як однорідний аналіз. Перевагою цього однорідного типу аналізу є менша складність і швидкість, так що його можна легко адаптувати для автоматизованого виконання.
  2. Гібридизація in vivo може здійснюватися безпосередньо в живих клітинах шляхом виявлення лише зондових сигналів, які гібридизуються і завдяки збільшеній швидкості гібридизації в розчині. Розроблені зонди для гібридизації FRET різних форматів.

Застосування FRET для виявлення мутації ДНК

Системи передачі енергії можуть бути створені (аналізи TDI) або порушені (аналізи загарбників) за допомогою олігонуклеотидних зондів FRET, спеціально розроблених для виявлення мутації ДНК. Аналізи загарбників використовують розкладаються зонди, такі як 5 ’аналізи нуклеаз; більше того, вони використовують два розкладаються зонди, а не один і один нерозкладаний зонд, що працюють узгоджено.

Як лінійні, так і олігонуклеотиди у формі шпильки використовуються для розвитку розгалужених структур ДНК, а потім вони в результаті руйнуються під час реакції. Інша перевага цього підходу полягає в тому, що він призводить до ефективного посилення сигналу і не вимагає ПЛР для виявлення дуже небагато цільових послідовностей. Суттєвою перевагою аналізів TDI є те, що зонди FRET виробляються в процесі виявлення, але для цього потрібна ампліфікація ПЛР.