Альфа-ліпоєва кислота захищає ендотеліальні клітини аорти людини від H2O2-індукованих травм та інгібіторів

Піксу Лю і Хуйдзун Сонце

Інститут стовбурових клітин раку, Медичний університет Даляня

116044 Далянь (Китай)

Електронна пошта [email protected], [email protected]

Статті, пов’язані з "

Facebook
Травма, спричинена 2O2, та інгібує атеросклероз у мишей, що нокаутують оверіектомізовані ліпопротеїни низької щільності - https://www.karger.com/Article/FullText/491537 @KargerPublisher "target =" _ blank "onclick =" javascript: window.open ( this.href, '', 'menubar = ні, панель інструментів = ні, змінна розміру = так, смуги прокрутки = так, висота = 400, ширина = 600'); return false; "title =" Написати цю сторінку "onclick =" ga ( 'send', 'event', 'FullText', 'Social Media', 'Fix Twitter'); "> Twitter
LinkedIn
Травма, спричинена 2O2, та інгібує атеросклероз у оваріектомізованих мишей з вибиванням ліпопротеїдів низької щільності% 0A% 0A https://www.karger.com/Article/FullText/491537 "onclick =" ga ('send', 'event', 'FullText', 'Social Media', 'Fix Email'); "> Електронна пошта

Анотація

Вступ

Незважаючи на значний терапевтичний прогрес за останні кілька десятиліть, атеросклероз залишається основною причиною смерті у всьому світі, особливо серед жінок у постменопаузі [1, 2]. У порівнянні з жінками в пременопаузі, у жінок у постменопаузі частішає серцево-судинні захворювання через втрату чутливості до внутрішнього або навіть зовнішнього естрогену [3]. Постулюється, що дефіцит естрогену сприяє високій захворюваності на атеросклероз у жінок у постменопаузі через роль у численних атерогенних процесах, включаючи запалення [4, 5], проліферацію судинних клітин гладких м'язів [6], генерацію активних форм кисню (АФК) [7] та апоптоз судинних ендотеліальних клітин [8]. Деякі дослідження продемонстрували, що замісна гормональна терапія (ЗГТ) може знизити ризик серцево-судинних захворювань у жінок у постменопаузі, але лише тоді, коли терапія починається на ранніх стадіях після менопаузи [9-12].

Багато досліджень показали, що запалення та окислювальний стрес відіграють центральну роль у прогресуванні атеросклерозу [2, 13, 14]. Повідомляється, що окислювальний стрес в результаті надмірного утворення внутрішньоклітинних АФК, включаючи гідроксильні радикали (OH -), перекис водню (H2O2) та супероксидний аніон (O2 -), відіграє ключову роль у розвитку та прогресуванні атеросклерозу шляхом сприяння дисфункція ендотелію, запалення та перекисне окислення ліпідів [15, 16]. Сімейство ферментів NADPH оксидази (Nox) та їх регуляторні субодиниці, включаючи p22phox, p47phox, Noxa1 та p67phox, є важливими джерелами АФК у судинній системі, спричинених стресом, гормонами та вазоактивними агентами. Як повідомляється, АФК активує NF-κB [17], який відіграє ключову роль у різних запальних та імунних реакціях та пов’язаний з розвитком атеросклерозу [18]. Крім того, було показано, що NF-κB бере участь у регуляції транскрипції експресії субодиниці Nox [19, 20]. Отже, фармакологічні засоби, які можуть послабити запалення та окислювальний стрес, перериваючи шлях NF-κB, повинні мати антиатерогенні ефекти.

Естроген безпосередньо чи опосередковано бере участь у регуляції імунних реакцій, проліферації клітин, запалення та адгезії клітин [18]. Показано, що сигналізація про естроген зменшує розвиток атеросклерозу завдяки швидким негеномним ефектам та/або класичним шляхом шляхом зв’язування з рецепторами естрогену (ERα та ERβ) [21-23]. Естроген також має антиоксидантні властивості, пригнічуючи експресію Nox та генеруючи O2 - супероксидний аніон [24]. Крім того, естроген проявляє свою атеропротекторну дію, зв’язуючись із своїми рецепторами, утворюючи оксид азоту в ендотеліальних клітинах, який, як правило, виконує захисну функцію на судини [25-27]. На жаль, рівень експресії рецепторів естрогену знижується на пізній стадії менопаузи. Як результат, добавки естрогену на цій стадії не можуть змінити ризик атеросклерозу [28, 29]. Отже, фармакологічний засіб, який може підвищувати рівень рецепторів естрогену, принесе користь жінкам у постменопаузі, захищаючи від атеросклерозу.

Як повідомляється, альфа-ліпоєва кислота (ALA), також відома як 1,2-дитиолан-3-пентанова кислота, 1,2-дитиолан-3-валеріанова кислота або тіоктова кислота, є потужним антиоксидантом, який може усунути внутрішньоклітинні АФК [ 30-32]. Кілька рядків доказів показали, що ALA має протизапальний та проти ожиріння ефект проти патологічного процесу атеросклерозу [33-35]. Однак механізми захисної функції ALA та її вплив на розвиток атеросклерозу в постменопаузі залишаються невідомими.

Матеріали і методи

Матеріали

Ендотеліальні клітини аорти людини (HAEC) були отримані з Інституту біохімії та клітинної біології Китайської академії наук (Шанхай, Китай). Поживне середовище клітин (DMEM, RPMI-1640) та фетальна бичача сироватка (FBS) були придбані у Gibco-BRL Co. (Gaithersburg, MD, USA). ALA (з чистотою> 99,5%) був придбаний у компанії Fushilai Medicine & Chemical Co., Ltd. (Чаншу, Китай). Флуоресцентний зонд DCFH-DA був придбаний в Інституті біотехнологій Бейотіме (Хаймен, Китай). Набори для аналізу білкового екстракту були отримані від KeyGEN Biotechnology (Нанкін, Китай). Антитіла, специфічні для Bcl-2, каспази-3, ERα, ERβ, ICAM-1, VCAM-1, IκBα, фосфорильований p65 (p-p65) та Nox4, були отримані від Proteintech Group (Ухань, Китай) та антитіла, специфічні для p65, вінкулін були придбані у Bioworld Technology (Нанкін, Китай). Інгібітор NF-κB PDTC був отриманий у компанії Beyotime (Цзянсу, Китай), а інгібітор Nox4 DPI та інгібітор рецепторів естрогену ICI182, 780 придбані у Sigma (Сент-Луїс, Міссурі, США).

Культура клітин та лікування H2O2

HAEC культивували в DMEM, що містить 10% FBS при 37 ° C у 5% CO2. Після досягнення 60% злиття HAEC обробляли різними концентраціями ALA (75, 150, 300 мкМ) протягом 24 годин перед обробкою H2O2 (1 мМ) протягом 4 годин. ALA розчиняли в диметилсульфоксиді.

Вестерн-блот-аналіз

Імунофлуоресцентне фарбування

У зазначені моменти диференціювання культивовані клітини двічі промивали забуференним фосфатом сольовим розчином (PBS) і фіксували 4% параформальдегідом/PBS протягом 10 хв при кімнатній температурі. Потім клітини пермеабілізували 0,5% Triton-X/PBS протягом 10 хв. Після промивання PBS клітини блокували 2% бичачим сироватковим альбуміном та інкубували протягом ночі при 4 ° C з первинними антитілами, включаючи ERα (Proteintech Group, розведення 1: 50) та p65 (Bioworld Technology, розведення 1: 50). Вторинні антитіла, включаючи кон'югований Alexa Fluor 488 анти-кролячий IgG (козячий, 1: 100, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, США), використовували згідно з інструкціями виробника. Зразки інкубували при кімнатній температурі протягом 1 години. Після промивання PBS і протизабарвлення DAPI зразки монтували за допомогою антифлодового розчину Prolong Gold (Thermo Fisher Scientific). Клітини візуалізували і отримували мікрофотографії за допомогою вертикального флуоресцентного мікроскопа (Olympus, Center Valley, PA, USA). Кількісне визначення інтенсивності флуоресценції проводили за допомогою ImageJ. Виміряли щонайменше 50 клітин з трьох різних областей на камеру.