Аналіз внутрішньопухлинної адаптивної імунної відповіді у добре диференційованих та диференційованих

1 Кафедра хірургії, відділення хірургічної онкології, Університет Південної Каліфорнії, Лос-Анджелес, CA 90033, США

2 Меморіальна лікарня Хоаг Пресвітеріан, Ньюпорт-Біч, Каліфорнія 92663, США

3 Кафедра медичної онкології з меланоми Техаського університету, Центр раку імені Андерсона, Х'юстон, Техас 77030, США

4 Кафедра біостатистики, Техаський університет, Центр раку імені Андерсона, Х'юстон, штат Техас 77030, США

5 Кафедра біології раку, Техаський університет, Центр раку імені Андерсона, Х'юстон, Техас 77030, США

6 Кафедра медичної онкології саркоми Техаського університету, Центр раку імені Андерсона, Х'юстон, Техас 77030, США

7 відділення хірургічної онкології, Комплексний онкологічний центр Джеймса, Медичний центр університету штату Огайо, Коламбус, штат Огайо 43210, США

8 Lion Biotechnologies, Woodland Hills, CA 91637, США

9 Відділ імунології, Центр раку Х. Лі Моффіт, Тампа, Флорида 33612, США

Анотація

1. Вступ

Хоча більшість сарком м'яких тканин зустрічається у верхніх і нижніх кінцівках, приблизно 20% виявляється в заочеревині, де пухлини часто можуть спричиняти значну захворюваність та смертність [1]. Добре диференційована (WD) та дедиференційована (DD) ліпосаркома є злоякісними пухлинами адипоцитарного походження та найпоширенішим гістологічним підтипом, який зустрічається в заочеревині. Пухлини WD складаються з переважно атипових адипоцитів, тоді як пухлини DD мають додаткову високоякісну клітинну частину [2, 3]. ДД-ліпосаркома може виникнути від ліпосаркоми ВД; однак точні відносини все ще не доведені.

При ретроперитонеальній ліпосаркомі WD/DD основним методом лікування є хірургічне втручання; однак, як правило, пухлини мають масивний розмір (середнє значення = 30 см) і можуть вражати сусідні вісцеральні органи та критичні структури, резекція часто є досить складною [4, 5]. Локорегіональні рецидиви трапляються часто, і пацієнти піддаються багаторазовим операціям з можливістю збільшення рівня ускладнень [4]. Окрім хірургічного втручання, існує кілька інших ефективних варіантів лікування. Роль променевої терапії недостатньо встановлена [5]. Часто проводять цитотоксичну хіміотерапію на основі доксорубіцину, особливо при захворюванні на ДД; однак недавній великий ретроспективний аналіз повідомив про об'єктивну відповідь лише 12% [6].

За останнє десятиліття було досягнуто значних успіхів у розумінні молекулярної біології ліпосаркоми WD/DD. Відмінною ознакою генетичних змін при цьому захворюванні є хромосомна ампліфікація в 12q13-15 [2, 3, 5]. Цей регіон включає від декількох сотень до тисяч генів, включаючи MDM2 та CDK4. Ампліфікація MDM2 відбувається майже у всіх пухлинах, і виявлення шляхом флуоресценції in situ гібридизацією часто використовується для діагностики ліпосаркоми WD/DD [2, 3]. Нещодавно з’явилося декілька нових методів лікування, що керуються біологією хвороби, і в даний час вони оцінюються в клінічних випробуваннях на ранніх стадіях [7]. Попередньо опубліковані дані щодо невеликої серії пацієнтів свідчать про те, що можна досягти стабілізації захворювання; проте об'єктивні показники відповіді все ще жахливо низькі: 5% для інгібітора MDM2, RG7112 та 3% для інгібітора CDK4/6, PD-0332991 [8, 9].

При меланомі блокада імунних контрольних точок - це імунотерапевтична стратегія, яка нещодавно показала вражаючі показники об’єктивної відповіді та навіть подовження виживання, незважаючи на запущену стадію захворювання та важке навантаження на пухлину [10–13]. Ці терапії інгібують молекулярні контрольні пункти (CTLA4, PD-1) або "гальма", які виникають природним чином в активованій Т-клітині. На відміну від вакцин, блокування імунної контрольної точки не індукує націлювання на конкретний антиген пухлини, а натомість підтримує активацію та цитотоксичну функцію в Т-клітинах, інфільтруючих пухлину, які вже природно сенсибілізовані до різноманітних антигенів пухлини. Блокуючи CTLA4 і PD-1 у пацієнтів з метастатичною меланомою, Wolchok et al. об'єктивний коефіцієнт відповіді 53% із зменшенням пухлини до 80% у багатьох людей, що реагували [12]. Клінічна ефективність імунної блокади контрольних точок також все частіше повідомляється для інших розвинутих солідних пухлин [14, 15].

Враховуючи обмежені та неефективні варіанти лікування, доступні в даний час пацієнтам із ретроперитонеальною ліпосаркомою WD та DD, ми прагнули вивчити природне мікросередовище пухлини з імунологічної точки зору як перший крок до вивчення потенційної доцільності імунотерапії при цій хворобі. На відміну від міксоїдної ліпосаркоми, яка має високу експресію антигену ракового яєчка NY-ESO-1 [16], на нашу думку, у ліпосаркомі WD/DD жодного разу не виявлено послідовного та надійного пухлинного антигену, що робить стратегії вакцинації менш привабливими. Нашою метою було вивчити адаптивну імунну відповідь, а особливо Т-клітини, що інфільтрують пухлину, та їх експресію PD-1. Потім ці дані можуть бути використані для подальшого оцінювання стратегій блокади імунних контрольних точок при ліпосаркомі WD/DD.

2. Матеріал і методи

Схвалення всіх частин цього дослідження було отримано Комісією з огляду інституцій Техаського університету, Центр онкологічних захворювань Андерсона.

2.1. Обробка та аналіз свіжих пухлин методом проточної цитометрії

2.2. Імуногістохімія тканини FFPE

2.3. Клінікопатологічна кореляція та статистичні методи

Дані клінічного результату були отримані із ретроспективної бази даних саркоми для пацієнтів із та без TLS, виявлених у наявних зрізах пухлини FFPE. Криві Каплана-Мейєра використовували для оцінки безрецидивної та загальної виживаності (RFS, OS) між групами пацієнтів. Порівняння RFS та OS між групами пацієнтів проводили за допомогою тестів log-rank. Всі тести були двосторонніми і