Байкалін послаблює ожиріння, спричинене дієтою, ожиріння та дисфункцію печінки, реакцію на дозу та потенціал
Кафедра фармакології медичного факультету Південно-Східного університету
87 Dingjiaqiao Road, Nanjing, Jiangsu, P. R. China, 210009
Тел. + 86-25-83272525, електронна пошта [email protected]
Статті, пов’язані з "
- Електронна пошта
Анотація
Вступ
Надмірна вага та ожиріння стали епідемією і вражають понад 2,1 мільярда людей у всьому світі [1]. Серед факторів, схильних до патофізіологічного розвитку ожиріння, надмірне споживання дієтичної енергії є найпоширенішою причиною [2]. Коли споживання енергії перевищує енерговитрати, надмірне накопичення клітинних ліпідів відбувається не тільки в жировій тканині, але і в позаматкових тканинах, таких як печінка [3,4]. Надмірне ектопічне відкладення ліпідів часто порушує нормальну клітинну фізіологічну функцію, що, якщо дозволити продовжувати без контролю, призведе до патологічного прогресування [3,4]. З розвитком ожиріння посилений ліпогенез печінки та нестерифіковані жирні кислоти в сироватці призводять до надмірного накопичення ліпідів печінки, що призводить до жирової печінки (також відомої як печінковий стеатоз), порушення функції печінки та, зрештою, печінкової недостатності [5,6]. Було підраховано, що 28,8 млн. Або приблизно 19% дорослих американців мають жирові захворювання печінки [7]. Оскільки печінка є життєво важливим органом, який бере участь у регулюванні травлення, метаболізмі поживних речовин та багатьох лікарських засобів, детоксикації та гомеостазі крові (наприклад, кольтвання), розробка засобів проти ожиріння з гепатопротекторними властивостями стала значним інтересом як для біомедичних дослідників, так і для клініцистів.
Матеріали і методи
Матеріали
Байкалін (вміст ВЕРХ 98%) був придбаний у компанії Guanghan Bio-Tech (Сичуань, Китай). Первинні антитіла проти фосфо-AMPKα (Thr172), AMPKα, фосфо-ACC (Ser79), ACC, фосфор-CaMKKβ (Ser511), GAPDH, біотинільовані білкові сходи та вторинні антитіла, мічені пероксидазою хрону, були придбані у Cell Signaling Technology (Beverly, MA, США). Антитіло CaMKKβ було з групи Proteintech (Чикаго, Іллінойс, США). Мембрани полівінілідендифториду та реагент для детектування вестерн-блот з посиленою хемілюмінесценцією (ECL) були придбані у Millipore (Billerica, MA, США). Набір для фарбування маслом червоного кольору O, набір для гематоксиліну та еозину, буфер для лізису RIPA та буфер для завантаження зразків 5X були придбані у Нанкінської сонячної біотехнології (Нанкін, Китай). Карбоксиметилцелюлоза натрію отримана від Sinopharm Chemical Reagent (Sanghai, Китай). Комплект для аналізу BCA був отриманий від Pierce Biotechnology (Рокфорд, Іллінойс, США).
Дослідження на тваринах
Біохімічні аналізи сироватки крові
Рівні тригліцеридів у сироватці крові, загальний холестерин, кількість холестерину, що міститься в ліпопротеїнах низької або високої щільності (LDL-c та HDL-c відповідно), аспартат-трансаміназі (AST) та аланін-трансаміназі (ALT), вимірювали за допомогою UniCel DxC 800 синхронних клінічних систем (Бекман Коултер, Пасадена, Каліфорнія, США) та комерційні набори клінічної діагностики (Shanghai Fuxing Changzheng Medical Co. Ltd .; Шанхай, Китай).
Фарбування гематоксиліном та еозином та оцінка стеатозу печінки
Заморожені тканини печінки розрізали (5 мкм) за допомогою мікротома (Leica Microsystems; Buffalo Grove, IL, США). Фарбування гематоксиліном та еозином проводили згідно з протоколом виробника. Стеатоз печінки оцінювали на основі бальної системи, розробленої Комітетом з патології Мережі клінічних досліджень NASH [19], та сертифікованим комісією патологоанатомом.
Олійно-червоне фарбування O
Зрізи печінки фарбували олійно-червоним набором для фарбування O і фарбували гематоксиліном для виявлення накопичення печінкових ліпідів згідно з протоколами виробника. Зображення були зроблені наосліп за допомогою світлового мікроскопа Olympus BX51 (Olympus America, Melville, NY, USA) зі збільшенням 400 ×.
Вестерн-блот-аналіз
Білки печінки екстрагували з частини подрібненої в порошок тканини за допомогою буфера лізису RIPA. Концентрацію білка визначали за допомогою набору для аналізу BCA. Білки кип'ятили у буфері для завантаження зразків 5X протягом 5 хв для аналізів імуноблотингу [20]. Рівну кількість білків печінки з кожного зразка розчиняли за допомогою 8% SDS-PAGE, переносили на мембрани полівінілідендифториду та піддавали стандартній процедурі імуноблотингу, включаючи інкубацію з первинним антитілом протягом ночі при 4 ° C. Імунокомплекси візуалізували за допомогою посиленої хемілюмінесценції та сканували для подальшого денситометричного аналізу.
Статистичний аналіз
Результати представлені як середнє значення ± SEM. Ефекти дієти з високим вмістом жиру та лікування байкаліном аналізували за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу (ANOVA). Для визначення відмінностей між групами проводили багаторазові порівняння за допомогою тесту Тукі. Рівень значущості прийнятий a апріорі становила ≤ 0,05.
Результати
Байкалін послаблює ожиріння, спричинене дієтами, і ожиріння печінки
Рис. 1
Байкалін послаблює ожиріння, спричинене дієтами, і ожиріння печінки. А. Маса тіла самців мишей C57BL/6J, яких годували нормальним раціоном, що служив нежирним контролем (LC), дієтою з високим вмістом жиру (HF) або дієтою з високим вмістом жиру, а також пероральним введенням трьох різних концентрацій байкаліну (100, 200 або 400 мг байкаліну/кг маси тіла/день протягом 14 тижнів відповідно). Байкалінове втручання було розпочато у віці 25 тижнів (після 16 тижнів дієтичного лікування з високим вмістом жиру). Мишам LC та HF щодня давали рівну кількість розчину натрію карбоксиметилцелюлози (300 мкл) як мишам, обробленим байкаліном. B. Співвідношення жирової прокладки епідидимуму до маси тіла (BW). C. Співвідношення печінки до маси тіла. D. Репрезентативні зображення черевної порожнини, жирової прокладки та печінки. abc: Групи без однієї букви суттєво відрізняються (P ≤ 0,05).