Біомолекули Безкоштовний повнотекстовий статистично розроблений засіб виявляє взаємодію між метаболізмом

Схема побудови двокопійного вектора сироваткового альбуміну людини (HSA) (червона область позначає касету експресії HSA). Наведені розміри не відповідають фактичному масштабу.

повнотекстовий

(а) Аналіз електрофорезу на додецилсульфат натрію в поліакриламідному гелі (SDS-PAGE) загального позаклітинного білка, що продукується в неоптимізованих (стандартних Invitrogen) умовах, Доріжка 1: Білкова сходи. Супернатант культури (20 мкл) від клону № 52 (одна копія HSA): Провулок 2, та клону № 14 (дві копії HSA): провулок 3. Стрілка вказує смугу HSA. (b) Матричний спектр пептидного лазерного десорбційного/іонізаційного часу прольоту (MALDI/TOF) білкової смуги від клону №14.

(а) Діаграма Парето, отримана з конструкції Плакетта-Бурмана, що представляє порядок та% внеску кожного параметра у виробництво стабільного HSA. Синій та помаранчевий кольори представляють негативний та позитивний внесок відповідно. (b) Оцінений вплив незалежних змінних на вироблення HSA клоном № 14. Червоний колір вказує на найбільш значущі, а синій - несуттєві параметри.

Тривимірні графіки поверхні відгуку та контурні графіки, що вказують на вплив окремих параметрів та взаємодію між двома параметрами. Вплив комбінованого впливу температури та метанолу (а), пептону та температури (б), а також метанолу та пептону на виробництво HSA (с). Кореляція між прогнозованою та спостережуваною реакцією (Y як HSA, що виробляється в мг/л) (d).

(а) Загальне вироблення позаклітинного білка, ІФА, гель-денситометрія аналізу секретованого HSA у двох копіях клонів №10, 14 та в клонах однокопійного типу 52 в оптимізованих (O) та неоптимізованих (U) умовах середовища. (b) SDS-PAGE аналіз фільтрату культури з клонів, згаданих у (а). Провулок 1 - Білкова драбина, Доріжки 2, 4-Клони 10, 14, в оптимізованих умовах та Провулки 3, 5 на неоптимізованому середовищі. Доріжки 6, 7 показують позаклітинний білковий профіль клону # 52 в оптимізованому та неоптимізованому станах відповідно.

(а) Аналіз життєздатності клітин (MTT) з клітинними лініями Vero. Зміни складності в проліферації вимірювали за відсутності будь-якої плодової бичачої сироватки (FBS) (▲), 5% FBS (■) або 10% FBS (●), 5% FBS + 1 г/л комерційного HSA (▼), 5 % FBS + очищений HSA 0,5 г/л (○), або 5% FBS + очищений HSA 1 г/л (◆). (b) SDS-PAGE аналіз очищеного HSA від клону № 14, культивованого на оптимізованому середовищі. Доріжка 1: Маркер, Доріжка 2: Комерційний HSA (4 мкг), Доріжка 3: 4 мкл фракції швидкої білкової рідинної хроматографії (FPLC). (c) Статистичну значимість різниці визначали парним t-тестом, беручи 5% FBS в якості стандартного еталону для експериментів з проліферацією клітин.