Експериментальний дієтологічний атеросклероз у квакерів-папуг (Myiopsitta monachus) - H

Інформація про статтю

Х. Бофрер, Ветеринарні клінічні науки, Школа ветеринарної медицини LSU, Skip Bertman Drive, Baton Rouge 70808, LA, США. Електронна адреса: [електронна пошта захищена]

Анотація

Подібно до людей, птахи мають високу сприйнятливість до атеросклерозу і, мабуть, демонструють найвищу поширеність і тяжкість атеросклеротичних уражень серед хребетних тварин у стандартних умовах утримання в неволі. 4,6 Непситтацинові моделі птахів широко використовуються для експериментальних досліджень атеросклеротичних уражень та пов'язаних з ними фізіологічних ускладнень у таких видів, як голуб Білий Карне (Columba livia domestica), Японські перепели (Coturnix japonica), і курка (Gallus gallus domesticus). 38,40,41,47

В інших моделях тварин на атеросклерозі беруть участь переважно такі види ссавців, як миші, щури, хом'яки, кролики, свині, морські свинки, собаки та нелюди. 40,47 Незважаючи на те, що вони мають подібну ліпідну фізіологію і наближаються до людей, ніж птахи, моделі ссавців (за винятком приматів) рідко розвивають спонтанні запущені ураження за звичайних обставин та при харчуванні за стандартною дієтою. Отже, результати, отримані в результаті експериментів із використанням інбредних та генетично модифікованих тварин, не можуть бути легко переведені на спонтанні ураження у тих самих видів та людей.

Тут ми повідомляємо про експериментальну дієтичну індукцію розвинених атеросклеротичних уражень у папуг квакерів (Myiopsitta monachus), невеликий вид пситтацину, сприйнятливий до спонтанного атеросклерозу.

Матеріали і методи

Експериментальний дизайн

Таблиця 1. Харчовий аналіз атерогенних та контрольних дієт, що використовуються в експерименті з індукованого дієтами атеросклерозу у квакерів-папуг (% сухої маси).

Збір та аналіз зразків

Щомісяця від кожної птиці з правої яремної вени отримували 1 мл зразка крові і поміщали в гепаринізовані пробірки (Microtainer; BD, Franklin Lakes, NJ). Для біохімічного аналізу кров центрифугували протягом 10 хвилин при 1000 × g, і плазму збирали і зберігали при –80 ° C до аналізу. Зразки використовували для вимірювання об'єму упакованих клітин, біохімічного профілю пташиної плазми (ротор птахів/рептилій, Abaxis VetScan; Abaxis, Union City, Каліфорнія), тригліцеридів, загального холестерину та ліпопротеїдів високої щільності (ЛПВЩ) (Ortho Vitros 250 Chemistry Analyzer, Рочестер, Нью-Йорк). Концентрації ліпопротеїдів дуже низької щільності (ЛПНЩ) та ліпопротеїдів низької щільності (ЛПНЩ) були отримані за формулою Фрідевальда. 13 Більшу пробу крові (3 мл) отримували під наркозом до евтаназії. Активність білка переносу ефіру холестерилового ефіру (CETP) вимірювали за допомогою комерційного аналізу відповідно до інструкцій виробника (ab65383; Abcam, Кембридж, Великобританія) та загального аналізу крові, проведеного за допомогою методики Лейкопетте. 11

Висхідну аорту та брахіоцефальні та легеневі артерії збирали протягом 15 хвилин після евтаназії, а зрізи фіксували у 10% нейтральному буферному формаліні для гістопатології та у 2% параформальдегіду та 1,25% глутаральдегіду в 0,1 М какодилатному буфері для просвічувальної електронної мікроскопії (TEM) . Серце і печінку також збирали і фіксували у 10% нейтральному забуференному формаліні. Додаткові свіжі ділянки артерій та печінки зберігали при –80 ° C для вимірювання холестерину. Стать визначали при розтині. Тверді тканини, закріплені формаліном, регулярно переробляли у парафін. П'ятимікронні зрізи вирізали і фарбували гематоксиліном та еозином, фон Косса для солей кальцію та трихромом Массона для колагену. Заморожені формаліном зафіксовані ділянки артерій також фарбували масляно-червоним O (ORO) для ліпідів. Артеріальні тканини, закріплені для електронної мікроскопії, обробляли, розтинали та фарбували із застосуванням стандартних методів, раніше описаних для артеріальних зразків пситтацину. 8 Крім того, зрізи товщиною 0,5 мкм, отримані з блоків, що використовуються для зрізів ТЕМ, фарбували толуїдиновим синім. Зрізи ТЕМ встановлювали на покритих колодієм мідних сітках, фарбували цитратом свинцю Рейнольдса та зображали за допомогою просвічуючого електронного мікроскопа JEM-1011 (JEOL, Токіо, Японія).

Типи атеросклеротичних уражень класифікували на типи від I до V згідно з опублікованою системою класифікації папуг, яка відображає класифікацію AHA. Серце та печінку оцінювали на гістопатологічних зрізах, а також приблизно 15-20 внутрішньоміокардіальних коронарних артерій на серце діаметром приблизно від 40 до 250 мкм. Загальний холестерин вимірювали у свіжих артеріальних зразках за допомогою комерційного аналізу згідно з інструкціями виробника (ab65359; Abcam). Поразки також якісно порівнювали зі спонтанними ураженнями у 16 папуг квакерів домашніх тварин (віковий діапазон, 2-16,5 років; стать: 6 самців, 3 самки, 7 невідомо), отримані у ветеринарній лабораторії патології (Zoo/Exotic Pathology Service, Сакраменто, Каліфорнія).

Статистичний аналіз

Вміст холестерину в печінці та активність CETP у плазмі крові між групами порівнювали за допомогою тесту Крускала-Уолліса. Повторні міри з часом аналізували, використовуючи лінійні змішані моделі з папугами як випадковою величиною, а обробка, час та багаточлени як фіксовані змінні, коли це доречно. Аналогічно аналізували вміст артеріального холестерину, але з часом та артеріями як фіксованими ефектами. Неоднорідність дисперсії та залежність між спостереженнями моделювались за допомогою функцій дисперсії та структур послідовної кореляції, коли це доречно. Конкуруючі моделі оцінювали на основі інформаційного критерію Акакайке, а припущення моделі оцінювали на залишкових та квантильних ділянках. Параметричне та непараметричне порівняння post hoc проводили з коригуванням Тукі. Співвідношення між типами уражень в аорті та брахіоцефальних артеріях та вмістом холестерину в плазмі при евтаназії або вмісті артеріального холестерину оцінювали за допомогою коефіцієнта кореляції τ Кендалла. Співвідношення між холестерином у плазмі при евтаназії та концентрацією артеріального та печінкового холестерину оцінювали за допомогою коефіцієнта кореляції Спірмена. A 32