Екстракт кореня Smilax aristolochiifolia та його сполуки Хлорогенова кислота та астильбін гальмують
Вірідіана Канделарія Перес-Наджера
1 División de Desarrollo Biotecnológico, Centro Universitario de la Ciénega-Universidad de Guadalajara, 47820 Окотлан, Мексика
Джанет Алехандра Гутьєррес-Урібе
2 Tecnológico de Monterrey, Centre de Biotecnología-FEMSA, 64849 Монтеррей, Мексика
Марілена Антунес-Рікардо
2 Tecnológico de Monterrey, Centre de Biotecnología-FEMSA, 64849 Монтеррей, Мексика
Серхіо Ідальго-Фігероа
3 Cátedra CONACYT, IPICYT/Consorcio de Investigación, Innovación y Desarrollo para las Zonas Áridas, 78216 Сан-Луїс-Потосі, Мексика
Кармен Лізетт Дель-Торо-Санчес
4 Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos, Університет Сонори, 83000 Ермосільо, Мексика
Луїс А. Салазар-Оліво
5 División de Biología Molecular, Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica (IPICYT), 78216 Сан-Луїс-Потосі, Мексика
Євгенія Луго-Сервантес
6 Unidad de Tecnología Alimentaria, Centre de Investigación y Asistencia en Tecnología y Diseño del Estado de Halisco, 44270 Гвадалахара, Мексика
Пов’язані дані
Дані, що використовуються для підтвердження результатів цього дослідження, доступні у відповідного автора за запитом.
Анотація
1. Вступ
Smilax aristolochiifolia Miller (Smilacaceae), відомий у народі як зарзапарілла, широко поширюється в Мексиці [10] і зазвичай використовується як відвар коренів, позначений як гіпоглікемічний [11] та для схуднення [12]. Фармакологічні дослідження повідомляють про гемопоетичні [13], гіпоглікемічні та гіпотензивні ефекти [14] для кореня S. aristolochiifolia. Хоча про діадіабетичний потенціал також повідомляли для інших видів Smilax, переважно S. china [15, 16], ідентичність біоактивних сполук, відповідальних за протидіабетичну дію S. aristolochiifolia, а також механізми їх дії поки невідомі. Тому ми прагнемо визначити основні біоактивні сполуки з кореня S. aristolochiifolia та охарактеризувати їх вплив на ферментативну активність α-амілази та α-глюкозидази.
2. Матеріали та методи
2.1. Матеріали
Рослини Smilax aristolochiifolia Miller (включаючи коріння) були зібрані в Апазапані, штат Веракрус, Мексика (19 ° 19′25,6 ″ пн.ш. та 96 ° 43′17,3 ″ з.д.) у жовтні 2015 року. Рослинний матеріал пройшов аутентифікацію доктором М. Чазаро ( Біологічного факультету, Університет Веракрузани), а зразок ваучера (10855) був зданий на зберігання в Інститут екології гербарію (IE-XAL), Халапа, Веракрус, Мексика. α-глюкозидаза (EC 3.2.1.20, від Saccharomyces cerevisiae, 28 Од/мг), акарбоза, ρ-нітрофеніл-α-D-глюкопіранозид (pNPG), свиняча панкреатична α-амілаза (EC 3.2.1.1, тип VI-B, із свинячої підшлункової залози, ≥10 Од/мг) та реагент 3,5-динітросаліцилової кислоти (DNS) були придбані у Sigma-Aldrich Co. (Сент-Луїс, Міссурі, США). Розчинний крохмаль був придбаний у Jalmek Científica (Монтеррей, Нідерланди, Мексика).
2.2. Приготування екстракту кореня S. aristolochiifolia
Корінь рослини сушили в темряві при кімнатній температурі, а потім висушений матеріал подрібнювали кульовим млином. Попередні аналізи показали, що екстракція коренів S. aristolochiifolia водною інфузією або гідроетанольною мацерацією дає той самий профіль елюції (рис. ). Екстракцію проводили мацерацією при кімнатній температурі (25 ° C) і перемішуванням протягом ночі, використовуючи як розчинник співвідношення тверда речовина: рідина 1: 20 мас./Об. В етанолі: вода (1: 1, об./Об.). Екстракт кореня S. aristolochiifolia (SAR) був отриманий фільтруванням через папір Whatman No. 4. Потім етанол елімінували концентруванням у вакуумі (IKA RV 10 digital, Staufen, Німеччина) при температурі 40 ° C та водою ліофільною сушкою. Сухий SAR зберігали при -80 ° C до використання.
2.3. Швидка відцентрова хроматографія
Фракції з SAR отримували за допомогою інструменту підготовчої швидкої відцентрової розділової хроматографії (FCPC) (Kromaton, Angers, France), ємністю ротора 1 л, працював у подвійному режимі: 0–57 хв у спадному режимі та 58–120 хв. у зростаючому режимі при 1000 об/хв та швидкості потоку 10 мл/хв, використовуючи етилацетат: вода (1: 1 об./об.) як двофазну систему розчинників, згідно з попередніми випробуваннями (таблиця S1). SAR (10 г) розчиняли в 160 мл системи розчинників, фільтрували і закачували в ротор. Сто двадцять фракцій були зібрані та згруповані в пули по 10 фракцій відповідно до подібності значень коефіцієнта розподілу (kd) для полегшення їх аналізу. Загалом 12 басейнів концентрували насухо при 45 ° C при зниженому тиску (EZ-2 Plus, Genevac Ltd., Великобританія) і зберігали при -20 ° C до випробування.
2.4. Високоефективний аналіз рідкої хроматографії
SAR та його фракції, отримані за допомогою FCPC, аналізували методом ВЕРХ-DAD (Agilent Technologies, серія 1200, Санта-Клара, Каліфорнія) згідно з методикою, описаною Becerra-Moreno et al. [17] з деякими змінами. З'єднання розділяли у колонці Luna 5 U C18, 4,6 мм ID × 250 мм (5 мкм) (Phenomex, Torrance, CA). Рухлива фаза складалася з розчинника А, води класу ВЕРХ (BDH, Пул, Великобританія), підкисленої 0,1% мурашиною кислотою (CTR Scientific, Монтеррей, Нідерланди, Мексика), та розчинника В, метанолу, що характеризується ВЕРХ (BDH, Пул, Великобританія), використовуючи градієнт при швидкості потоку 0,8 мл/хв. Частка рухомої фази підтримувалася наступним чином: 0–3 хв (В, від 0% до 18%); 3–8 хв (В, від 18% до 30%); 8–35 хв (В, від 30% до 42%); 35–40 хв (В, 42% - 48%); 40–45 хв (В, від 48% до 60%); 45–50 хв (В, від 60% до 100%); 50–60 хв (В, від 100% до 0%). Хроматограми отримували при 280 нм, вводили 10 мкл зразка та збирали спектри поглинання УФ. Результати кількісного визначення виражали у вигляді еквівалентів хлорогенової кислоти або кемпферол-3-О-глюкозиду на основі калібрувальної кривої відповідних стандартів.