Нейтрофіли людини у пацієнтів із позитивною серологією на хворобу Шагаса Журнал імунології та

СПІЛКИ

Автор-кореспондент (Адреса):

Стаття, пов’язана з цим Опубліковано, Google Scholar

Поліморфно-ядерні (ПМН) нейтрофільні лейкоцити - це клітини вродженого імунітету, розпізнані в мазку периферичної крові через їх особливе багатолопатеве ядро. Кільцеподібні ядерні форми характерні для щурів та мишей, що описується при деяких патологіях як у людей, так і у здорових суб’єктів. Ці нейтрофіли були виявлені на початку у пацієнтів із хворобою Шагаса. Тут це дослідження було проведено з метою спостереження за поведінкою та морфологічними характеристиками ПМН аутологічної культури, а з іншого боку, її розподіл за статтю у здорових осіб (H) та з позитивною серологією Chagas (CH).

Матеріали і методи: Кількісне визначення кільцевих клітин у мазках гепаринізованих зразків крові людини з і без позитивної серології для Шагаса; тестування методом цитохімічної реакції на мієлопероксидазу (МПО); аутологічні культури клітин; LPS-тест для генерування NET, ДНК, що візуалізується за допомогою DAPI в імунофлуоресцентній мікроскопії; ультраструктурне дослідження за допомогою трансмісійної електронної мікроскопії (ТЕМ).

Результати: В обох групах (Н і СН) не виявлено суттєвих відмінностей у мазках крові за кількістю нейтрофілів з кільцевими ядрами між статями. Істотні відмінності (p Вступ

Нещодавно повідомлялося, що нейтрофіли беруть ключову роль у ефекторних та регуляторних механізмах вроджених та адаптивних реакцій [1-3]. Нейтрофіли також називають поліморфноядерними (ПМН), оскільки їх ядро може мати від трьох до п’яти часточок, з’єднаних тонкими хроматиновими містками. Було запропоновано, що білковий склад ядерної оболонки нейтрофілів дозволяє їм "деформуватися" свого ядра і сприятиме міграції активованих клітин із судин до місць зараження, а також лобуляції та утворенням у кільці [4,5]. Про існування мишачого ПМН з кільцеподібним ядром було відомо давно, але в нейтрофілах людини кільцеве ядро спостерігалося раніше Кабралом у 1987 р. У хворих на шагасних та здорових людей [6,7]. Кільцеподібні ядра в нейтрофілах складалися з трьох-чотирьох ділянок, пелюстково повністю з'єднаних між собою, деякі з них тоненькою смужкою ДНК. Було висловлено припущення, що велика кількість (близько 15%) цих клітин у периферичній крові припускає, що вони можуть бути нормальним еволюційним етапом розвитку ПМН людини [6,7]. Більше того, при деяких патологіях, таких як інфекційний мононуклеоз, мієлодиспластичні синдроми та інші, кільцеві ядра також спостерігались у нейтрофілах людини [8-15].

PMN розпізнають мікроорганізми через різні рецептори, а розпізнавання сприяє фагоцитозу, а потім цитотоксичній деструкції [16]. Гранули мають дуже різноманітний багатий вміст і набір деградуючих мікробіостатичних або мікробіцидних пептидів, таких як мієлопероксидаза (MPO), в азурофільних гранулах [17]. При запальних станах ПМН захоплюють і вбивають мікроби через позаклітинні пастки (NET), що складаються з хроматину, гістону та гранульованих білків [18-21]. NET були запропоновані як мости для приєднання вроджених та адаптивних імунних відповідей шляхом зниження порогу активації Т-клітин [22]. Він також описав генерування NET із стерильними запальними стимулами з кристалів урату натрію [23]. NET також були причетні до тромбозів, пошкоджень тканин та аутоімунітету [24-26]. Вивільнення NET може бути "літичним NETosis суїцидальним", коли воно рухає смертю від ПМН, або "життєво важливим NETosis" у випадку ПМН, які все ще живі [25,26]. У літературних звітах не зустрічається утворення NET у нейтрофілах з кільцевими ядрами.

Були описані нейтрофіли, які вивільняють хемокіни, які залучають Т-клітини до місць запалення, та [27-29] цитокіни, які впливають на диференціацію та проліферацію, посилюючи її в одних випадках та пригнічуючи в інших [30,31]. Цитокіни IL17A та IL17F, що виділяються клітинами Th 17, індукують швидку і масивну інфільтрацію тканини, ураженої нейтрофілами [16]. У разі паразитарних інфекцій, таких як хвороба Шагаса, роль сімейних цитокінів IL 17 є сферою сучасних досліджень [32].

Тут це дослідження було проведено з метою спостереження за поведінкою та морфологічними характеристиками ПМН аутологічної культури, а з іншого боку, її розподіл за статтю у здорових осіб (H) та з позитивною серологією Chagas (CH).

Гепаринізовані зразки крові людини відбирали з етичної згоди відповідно до процедур, затверджених етичним комітетом Національної лікарні клініки R: 107/12, Протокол I, № 110, 12/04/12. Зразки, передані Банком крові, Інститутом гематології та гемотерапії Національного університету Кордови анонімно, з негативною серологією: Хадлсон (Wiener), VDRL (Wiener), Chagas HAI (Wiener) Chagas EIE (Biomerieux), HBs EIE (Biomerieux ), HBc (Biomerieux), HCV EIE (Murex), HIV Ac EIE (Biomerieux), HIV Ag EIE (Biomerieux), HTLV EIE (Murex). Особи, які вважаються «здоровими» (H) n = 30, 22 чоловіки та 8 жінок, віковий діапазон 20-63; і лише ті з позитивною серологією для Chagas (CH) n = 10 HAI (+) та EIE (+), 6 чоловіків та 4 жінки, віковий діапазон: 37-50.

Ми проводили розширені або цілі мазки крові у всіх випадках та на зразках аутологічних культур. Мазки фіксували в етиловому спирті 96º, 15 хвилин фарбування: гематоксилін/еозин (H/E). Нейтрофіли з кільцевим ядром візуалізували за допомогою оптичної мікроскопії, і відсоток кільцевих клітин у даному цитопрепараті розраховували з урахуванням 100 нейтрофілів. Результати виражаються як середнє значення ± стандартне відхилення.