Опісторхоз з прозапальними цитокінами (IL-1β та TNF-α) впливає на ризик розвитку
Анотація
Передумови
Хронічне запалення та повторне зараження Opisthorchis viverrini (O. viverrini) індукує внутрішньопечінкову холангіокарциному (ICC). Запальні цитокіни, такі як інтерлейкін (ІЛ) та фактор некрозу пухлини (ФНО), є речовинами в імунній системі, які сприяють запаленню та викликають прогресування захворювання. Гени, які допомагають експресувати прозапальні цитокіни, можуть впливати на сприйнятливість людини до хвороб, особливо при хронічному запаленні, пов'язаному з раком. Це дослідження мало на меті дослідити фактори ризику розвитку ІКК із акцентом на описторхоз та поліморфізм прозапальних цитокінів (ІЛ-1β і TNF-α).
Методи
Це дослідження було вкладеним дослідженням випадків контролю в рамках когортного дослідження. 219 суб'єктів, які розробили первинний ICC, були ідентифіковані та зіставлені з двома нераковими контролями з тієї самої когорти на основі статі та віку при наборі (± 3 роки). Ан O. viverrini-Антитіла IgG оцінювали за допомогою імуноферментного аналізу. ІЛ-1β і TNF-α поліморфізми аналізували за допомогою ланцюгової реакції полімерази з аналізом плавлення з високою роздільною здатністю. Асоціації між змінними та ICC оцінювали за допомогою умовної логістичної регресії.
Результати
Суб'єкти з високою інтенсивністю зараження мали вищий ризик МКК, ніж ті, хто мав низький рівень (АБО = 2,1; 95% ДІ: 1,2–3,9). Суб'єкти з усіма генотипами TNF-α (GG, GA, AA) та висока інтенсивність зараження були суттєво пов’язані з підвищеним ризиком ICC (стор
Передумови
Рівень захворюваності внутрішньопечінковою холангіокарциномою (ICC) на північному сході - найвищий рівень захворюваності в Таїланді - з останнього звіту, Рак у Таїланді, вип. VII, 2007–2009, показали, що це найпоширеніший рак у чоловіків (стандартизований за віком рівень захворюваності, ASR = 67,1 на 100 000) і третій за поширеністю рак у жінок (ASR = 30,9). У місті Хон-Каен, розташованому на північному сході Таїланду, захворюваність на ICC становить 57,4 ASR у чоловіків та 23,1 у жінок на 100 000 [1].
Методи
Вивчати дизайн
Це дослідження було частиною більш масштабного дослідження, відомого як когортне дослідження Кхон Каена (KKCS), яке раніше проводилося [17,18,19,20]. Це була підходяща платформа для перевірки гіпотези про ризик впливу взаємодії господар-середовище з МКК. Коротко кажучи, в цих експериментах використовували позитивних суб'єктів МТП (МКБ-10: 22.1) та вибірку незахищених контролів, які були включені до складу КККС.
Вивчення предметів
Серед 23 584 суб'єктів, які потрапили в КККС (чоловіки 32,6%: жінки 67,4%), було виявлено 219 учасників когорти (0,9%), у яких розвинулося первинне злоякісне утворення внутрішньопечінкових жовчних проток печінки (C22,1) (чоловіки 57,0%: жінки 43,0%). Оскільки ICC рідко діагностується за допомогою біопсії печінки та гістопатології (6,9%), критеріями включення як випадок був діагноз принаймні за допомогою УЗД, з контрастною рентгенологією або без неї (9,6%) та онкомаркерами, такими як CA19–9 (83,5%) . Життєвий стан та дата смерті для потенційних випадків були встановлені шляхом зв’язку з картою про смерті в Таїланді в базі даних Національного управління охорони здоров’я (NHSO) разом із демографічною базою даних Міністерства внутрішніх справ. Усі випадки МТП померли протягом 2 років після встановлення діагнозу. Два випадки контролю раку з тієї самої когортної популяції були випадковим чином обрані для відповідності кожному випадку на основі статі та віку при наборі (± 3 роки).
Виявлення O. viverrini-Антитіла IgG
Виявлення O. viverrini-Антитіла IgG оцінювали в паразитологічній лабораторії медичного факультету університету Хон Каен, Таїланд. Непрямий фермент, пов'язаний з імуносорбентним аналізом (ІФА), використовували для аналізу сироватки випадків та їх відповідних контролів, як повідомлялося раніше [21, 22]. Зразки аналізували як дублікати з оптичною щільністю (OD) при 620 нм під зчитувачем ELISA. Середнє значення OD було використано як граничне значення, OD ≤0,24 та OD> 0,24.
Аналіз ІЛ-1β і TNF-α поліморфізми
Геномну ДНК витягували з фракцій матової оболонки 170 випадків (77,6%) з 219 відповідних випадків МКК та 355 (81,0%) з 438 відповідних контролів, використовуючи стандартні протоколи міні-набору геномної ДНК з протеїназою К (Geneaid Biotech).
Посилення ІЛ-1β C-511 T було досягнуто за допомогою двох праймерів, [F]: 5′- AATTTCTCAGCCTCCTACTTC-3 ′ і [R]: 5′- GTTTGGTATCTGICCGTTTC-3 ′. TNF-α Ген G308A ампліфікували, використовуючи [F]: 5′- TAGGTTTTGAGGGGCATG -3 ′ та [R]: 5′- CTGGGICCCTGACTGATTT-3 ′ в реакції ПЛР. Обидва генетичні поліморфізми проводили в системі ПЛР LightCycler® 480 у реальному часі з кінцевим об’ємом 20 мкл, що містить 10 мкл основного суміші, 4,4 мкл H2O, 3 мМ MgCl2, 0,3 мкМ кожного праймера та 200 нг ДНК шаблон. Дані аналізу плавлення з високою роздільною здатністю аналізували за допомогою програмного забезпечення для сканування генів LightCycler 480® версії 1.5 (Roche). Нормалізовані криві плавлення та піки плавлення варіації послідовності оцінювали та порівнювали із зразком дикого типу. Різні графіки піків плавлення проілюстровані на рис. 1а для ІЛ-1β C-511 T та рис. 1b для TNF-α G-308A. Варіації послідовності відрізнялися різною формою кривих плавлення (рис. 1в для ІЛ-1β C-511T та рис. 1d для TNF-α G-308A). Для поліпшення якості генотипування та валідації, 10% випадкових зразків генотипування були підтверджені методом ПЛР із використанням методів поліморфізму довжини фрагментів рестрикції (PCR-RFLP).