Original Article Аеробні вправи у поєднанні з олією самари можуть покращити гіперліпідемію за рахунок зменшення
Повний текст
Оригінальна стаття
Аеробні вправи у поєднанні з олією самари можуть покращитися
гіперліпідемія за рахунок зменшення PCSK9 та збільшення рівня ЛПНЩ
Цзінь-Фен Чжао, Я-Сінь Ван, Юань-Кун Донг, Цзюнь-Чжень Ши, Хуей Лі, Бао-Ай Ву
Департамент університету Шаньсі, місто Тайюань 030000, провінція Шаньсі, Китай
Надійшла до редакції 5 грудня 2018 року; Прийнято 10 квітня 2019 р .; Epub 15 травня 2019 р .; Опубліковано 30 травня 2019 р
Анотація: Гіперліпідемія є фактором ризику розвитку інсульту, ішемічної хвороби серця, інфаркту міокарда, раптової смерті тощо. Аеробні вправи та розумна дієта є ефективними способами регулювання ліпідного обміну, а поєднання фізичних вправ та дієти може покращити гіперліпідемію. Однак механізм не зовсім зрозумілий. PCSK9 - це ген, який бере участь в метаболізмі холестерину, він спричинює зменшення рецепторів ЛПНЩ на поверхні гепатоцитів, що, в свою чергу, зменшує здатність гепатоцитів очищати частинки ЛПНЩ, що призводить до підвищення рівня холестерину. У цьому дослідженні аеробні вправи у поєднанні з олією самари знижували рівень ТК, ТГ та ЛПНЩ (стор 0,05). Вправа комбіноване
з олією самари було значно кращим за одноразове втручання і майже повернулось до нормального рівня (p>0,05).
Ці результати показують, що аеробні вправи у поєднанні з олією самари можуть покращити гіперліпідемію, знижуючи регуляцію
експресія PCSK9 і підвищує експресію LDLR.
Ключові слова: аеробні вправи, олія самари, гіперліпідемія, PCSK9, LDLR
Гіперліпідемія (ГЛ) відноситься до концентрації ліпідів у плазмі, що перевищує норму, що також називалося дисліпідемією. Гіперліпідемія є потенційним патогенним фактором для таких основних захворювань, як атеросклероз та ішемічна хвороба серця [1]. Профілактика та лікування гіперліпідемії має дуже важливе практичне значення для контролю частоти та смертності серцево-судинних та цереброваскулярних захворювань [2]. В останні роки дослідження виявили, що дисбаланс експресії певних генів спричиняє аномальні зміни рецепторів, аполіпопротеїнів або ферментів, що беруть участь у опосередкуванні ліпідного балансу в крові, а синтез, транспорт і метаболізм ліпопротеїдів стають відхилення від норми, підвищення системного рівня ліпідів у крові [3].
Оскільки Seidah [4] відкрив протілковий конвертаза-субтилізин/кексин типу 9 (PCSK9) у 2003 році, дослідники виявили, що PCSK9 пов'язує домен епідермального фактора росту (EGF) до ліпопротеїнових рецепторів з низькою щільністю (LDLR) для сприяння LD-LR для ко-інтерналізації та транспортування до лізосом
для деградації. Таким чином, LDLR більше не може повертатися до клітинної мембрани, щоб функціонувати. Вважається, що PCSK9 відіграє ключову роль у метаболізмі ліпідів [5-10] і отримав підвищену увагу [11].
Упевнені, що аеробні вправи [22] та олія самари [15] мають позитивні ефекти у зменшенні ідентифікації губ у крові відповідно, але дослідження впливу аеробних вправ у поєднанні з олією самари на важливі гени метаболізму холестерину PCSK9 та LDLR не проводилось докладно повідомляється. Отже, це дослідження розробило експерименти для індукування гіперліпідемії у мишей C57BL/6J за допомогою дієти з високим вмістом жиру та спостереження ефекту аеробних вправ у поєднанні з олією самари на експресію PCSK9 та LDLR у мишей з гіперліпідемією.
Матеріали і методи
Тварини та протокол вправ
Загалом 50 самців мишей C57BL/6J вагою (18-20) г було надано Експериментальним центром тварин Національної адміністрації продовольства та медикаментів Китаю, а номер ліцензії - SCXK (Пекін) 2014-0013. Мишей розділили на 5 клітин у кімнаті з 12:12-годинним циклом світло-темрява, температура становила 18 ° C-23 ° C, а вологість становила 50% -60%. Миші мали вільний доступ як до їжі, так і до води.
Через 2 тижні адаптивного годування мишей випадковим чином розподіляли на нормальну контрольну групу (NC-група, n = 10), групу з високим вмістом жиру (група M, n = 10), групу з підвищеним вмістом жиру (група ME, n = 10), з високим вмістом жиру з олією групи самари (група MS, n = 10) та з високим вмістом жиру з групою олії самари (група MES, n = 10). Дієта з високим вмістом жиру складала 22,4% білків, 45,1% вуглеводів, 16,4% жирів, 5,8% сирої клітковини, 1,7% кальцію, 1,1% фосфору. Після успішного моделювання на мишах з гіперліпідемією, групи МС годували олією самари (0,5 мг/г) щодня під час годування дієтою з високим вмістом жиру, групи NC та ME, що годували сольовим розчином. Група ME була використана для вправ на біговій доріжці після завершення знайомого складання поїздів. Групу MES використовували для втручання аеробних вправ у поєднанні з олією самари. Визначено, що інтенсивність аеробних вправ становить 15 м/хв × 45 хв, нахил 6%, шість днів вправ на тиждень (починаючи з 19:00), і кожна вправа мала 5-хвилинну розминку, загалом 8 тижнів.
Збір тканин
Після останнього запуску експерименту, голодування протягом 12 годин, зважування, проводили абдомінальну анестезію пентобарбіталом натрію в дозі 80 мг/кг та 2 мл черевної аорти
була взята кров. Мишей евтаназували, і всі печінки швидко виймали і промивали неодноразово крижаним фізіологічним розчином, поки не залишилося крові, а воду протирали фільтрувальним папером, фотографували та зберігали. Після завершення збору тканин тушу миші обробляли відповідно до відповідних вимог.
Визначення плазмового маркера холестерину обмін речовин
Зібрану мишачу кров центрифугували при 12000 об/хв протягом 2 хвилин при 4 ° C, і верхню сироватку брали і зберігали при -20 ° C до аналізу. Загальний холестерин у плазмі (TC), триглікерид (TG), холестерин ліпопротеїдів низької щільності (LDL-C) та холестерин ліпопротеїдів високої щільності (HDL-C) вимірювали за допомогою зчитувача мікропланшетів за допомогою набору для аналізу (Нанкінський інститут біоінженерії).
Визначення розміру ураження тканини печінки мишей
Частина тканини печінки мишей фіксували 10% формаліном протягом 24 годин. Градієнтний етанол був зневоднений і прозорий, вбудований у парафін, а зрізи депарафінізовані до гідратації градієнтним етанолом, забарвленим гематоксиліном та еозином (H&E). Патологічні зміни печінки спостерігалися під мікроскопом за розміром вакуолей і крапель ліпідів.
Виділення РНК та процедури ПЛР
Тканину печінки подрібнювали до порошкової форми за умови постійного додавання рідкого азоту, а загальну РНК печінки екстрагували відповідно до операційних вимог набору для загальної екстракції РНК колонкової тканини тварин (Shanghai Shenggong Bioengineering Co., Ltd.), а концентрацію РНК вимірювали за допомогою флуоресцентного спектрофотометра.
РНК тканини печінки миші було переписано в ампліфікований шаблон кДНК у металевій ванні при 4 ° C відповідно до інструкцій з набору зворотної транскрипції TaKaRa та додано до наступної системи реакції RT-PCR. Праймери, що використовуються в RT-PCR, показані на
Вестерн-блот
центрифугували і супернатант зберігали для аналізу білка. Для визначення концентрації білка застосовували колориметричний метод BCA. Кількість кількісно визначали за 120 мкг, кип’ятили протягом 5 хвилин і завантажували в 10% гель SDS-PAGE, 1,5 години, повний вологий електроперенос, переносили на мембрану PVDF. Блок з 5% знежиреного молока
білок визначали за допомогою програмного забезпечення Image J для отримання рівня відносної експресії цільового білка.
Усі експериментальні дані виражаються як середнє ± стандартне відхилення (середнє ± SD), а статистичний аналіз проводився за допомогою програмного забезпечення SPSS 17.0. Після дисперсійного тесту на нормальність та однорідність проводили односторонній дисперсійний аналіз, і для порівняння між групами використовували SNK-q. р 0,05).