Ожиріння з дефіцитом лептину продовжує виживання при мишачій моделі мієлодиспластичного синдрому
Анотація
Вступ
Ожиріння представляє основний ризик для здоров'я і незалежно пов'язане з розвитком групи розладів, які зазвичай називають метаболічними захворюваннями, включаючи цукровий діабет 2 типу (T2DM), серцево-судинні захворювання, інсульт, нейродегенерацію та захворювання печінки. Крім того, причинно-наслідкові зв'язки між індексом маси тіла (ІМТ) та багатьма видами раку стають все більш очевидними.41
В останнє десятиліття ожиріння асоціюється не тільки з більшістю форм раку на основі пухлини, але і з гематологічними злоякісними захворюваннями.5 У пацієнтів з ожирінням підвищений ризик лейкемії 6, а у дітей надмірна маса жиру пов'язана як із посиленням захворюваність і нижча загальна виживаність при лейкемії.7. Крім того, ожиріння все частіше асоціюється з підвищеним ризиком захворюваності на мієлодиспластичні синдроми (MDS) .98
Методи
Детальні методи доступні в Інтернет-додаткових методах
10-тижневим самцям мишей Ob/Ob, разом із контролем худих сміття, придбаних у лабораторії Джексона (США), була проведена трансплантація кісткового мозку (BMT), отримуючи кістковий мозок від 6/8-тижневого самця дикого типу ( WT) Миші C57bl/6 (лабораторія Джексона) або самці мишей NHD13, отримані з колоній, що утримуються в Центрі тварин Альфреда з медичних досліджень (AMREP). Усі експерименти на тваринах були схвалені Комітетом з етики тварин AMREP і проводились відповідно до Національних рекомендацій Ради з питань охорони здоров’я та медичних досліджень для експериментів на тваринах (Ethics E/1444/2014/B).
Результати
Повні миші виявляють гемопоетичний фенотип після семи місяців мієлодиспластичного синдрому
Рисунок 1. Миші Ob/Ob демонструють схожий гемопоетичний фенотип з мишами дикого типу при ураженні мієлодиспластичним синдромом, незважаючи на вже існуючий моноцитоз. (А) Експериментальний огляд: Контроль за мишами Ob/Ob та WT, що пересаджували або кістковий мозок WT, або NHD13 (BM), спостерігався до тих пір, поки розвиток симптомів MDS не вимагав евтаназії. Через сім місяців після трансплантації кісткового мозку мишам брали кров для аналізу (B – E), а підгрупу відбирали для аналізу тканин (F – I). (B) Аналіз крові, отриманий за допомогою CBC, (C) аналіз потокової цитометрії лімфоцитів та (D) кількість тромбоцитів CBC та аналіз проточної цитометрії сітчастих тромбоцитів (% тромбоцитів). (E) аналіз мієлоїдних клітин методом проточної цитометрії на лізованій крові. (F) Аналіз проточної цитометрії клітин BM, включаючи довгострокові стовбурові клітини та мієлоїдні попередники, та (G) аналіз клітинного циклу (DAPI). (H – I) Аналіз проточної цитометрії імунних клітин селезінки, включаючи (H) довгострокові стовбурові клітини та мієлоїдні попередники та (I) мієлоїдні популяції. (A – E); n = 12-16; (F – I); n = 3. Усі дані виражаються як середнє значення ± SEM. * P # P
Моделью MDS, яку ми вибрали для використання, була трансгенна миша NHD13, яка надмірно експресує злитий білок NUX98-HOXD13, який асоціюється з MDS людини.19 Ці миші мають фенотип MDS, який може перерости в AML з проникненням
30% протягом 14 місяців.19 Відповідно, спочатку ми оцінили вплив ожиріння на гемопоез, а особливо на мієлопоез, через сім місяців після трансплантації BM від трансгенних донорських мишей NHD13 - момент часу, коли всі миші залишалися живими (тобто передбачуваний половина точки виживання моделі).
Миші з ожирінням демонструють тривале виживання при ураженні мієлодиспластичним синдромом, незважаючи на посилений мієлопоез
Рисунок 2. Миші Ob/Ob демонструють тривале виживання при ураженні мієлодиспластичним синдромом, незважаючи на існуючий моноцитоз. Контроль за мишами Ob/Ob та контролерами WT, трансплантованими або WT, або NHD13 BM, спостерігали за (A) кривою виживання Каплана-Мейєра. (B) Частка хвороби, що спричиняє смерть. Циркулюючі популяції мієлоїдних клітин, включаючи (C) загальні моноцити, (D) Ly-6C hi моноцити, (E) Ly-6C lo моноцити та (F) нейтрофіли, проаналізовані за допомогою проточної цитометрії на лізованій крові. Циркулюючі лімфоїдні популяції, включаючи (G) В-клітини та (H) Т-клітини, проаналізовані за допомогою проточної цитометрії на лізованій крові. (A, B); n = 16; (C – H); n = 12–16. Усі дані виражаються як середнє значення ± SEM. WT: дикого типу; МДС: мієлодиспластичний синдром; T-ALL: Т-клітинний гострий лімфобластний лейкоз; CMML: хронічний мієломоноцитарний лейкоз; ОМЛ: гострий мієлоїдний лейкоз; BMT: трансплантація кісткового мозку.
Кінцева точка крові та характеристики селезінки
Рисунок 3. Миші Ob/Ob демонструють подібний фенотип захворювання в кінцевій точці MDS/AML, незважаючи на посилений моноцитоз. Контроль за мишами Ob/Ob та контрольованим контролем WT, трансплантованим WT або NHD13 кістковим мозком (BM), поки розвиток симптомів MDS не вимагав евтаназії. Аналіз цитометрії кровотоку (А) мієлоїдних клітин, (В) лімфоцитів та (С) клітин-попередників. CBC-аналіз (D) еритроцитів, (E) гемоглобіну, (F) гематокриту, (G) середнього корпускулярного об'єму та (H) тромбоцитів. (I) Ваги селезінки та репрезентативні зображення, масштаб 0,5 см. (J) Аналіз проточної цитометрії HSPC та мієлоїдних попередників у БМ. (К) Репрезентативні зображення БМ від нежирних та Ob/Ob мишей, стрілки позначають розширені кровоносні судини, A позначає адипоцити. (L) Аналіз проточної цитометрії HSPC в селезінці. (A – I); n = 11–16; (J – L); n = 4–8. Усі дані виражаються як середнє значення ± SEM. * P # P