Поєднання екстракту корейського червоного женьшеню та Glycyrrhiza glabra L

Департамент харчової науки та харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Корейський інститут харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Департамент харчової науки та харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Корейський інститут харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Департамент харчової науки та харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Корейський інститут харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Корейський дослідницький інститут корпорації женьшеню, Korea Ginseng Corporation, Теджон, Корея.

Департамент харчової науки та біотехнологій, Національний університет Канвон, Чунчхон, Корея.

Адресна кореспонденція з: Іл-Джун Кан, доктор філософії, Департамент харчових наук та харчування, Університет Халлім, Чунчхон 24252, Корея,

Департамент харчової науки та харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Корейський інститут харчування, Університет Халлім, Чунчхон, Корея.

Анотація

Вступ

Ожиріння - сучасне хронічне запальне захворювання. 1 Ожиріння впливає не тільки на зовнішній вигляд, а й спричиняє множинні метаболічні синдроми, включаючи гіперліпідемію, серцево-судинні захворювання, діабет 2 типу та неалкогольну жирову печінку. 2 Поточною концепцією лікування ожиріння є управління метаболічним балансом між споживанням та споживанням енергії. 3

При лікуванні ожиріння ефективність та безпека натуральних продуктів є більш обнадійливими завдяки меншій кількості побічних ефектів порівняно з традиційними хімічними синтетичними препаратами, які, як відомо, викликають діарею та блювоту. 4–6 За останні роки багато досліджень повідомляють, що два або більше натуральних продуктів, змішаних при різних співвідношеннях, мають більш виражені функції, ніж окремий натуральний продукт. 7–10 Це може бути пов’язано із синергічним впливом активних сполук, що містяться в різних природних продуктах. 11

Червоний женьшень - це ферментований сорт женьшеню, приготований сушінням на пару. 12 Це може знизити кров'яний тиск і запобігти окисленню. Крім того, він має протипухлинну, проти ожиріння, гіполіпідемічну та гіпоглікемічну дію. 13–16 Ферментований червоний женьшень може збільшити вміст загальних гінзенозидів, поліпшити його біодоступність та посилити фармакологічну активність. 17 Сапоніни належать до основних активних сполук червоного женьшеню. Широко повідомляється, що сапоніни можуть пригнічувати активність ліпази, 18 зменшувати тригліцериди плазми (ТГ) і послаблювати адипогенез. 19 Glycyrrhiza glabra Л. культивується у багатьох країнах 20 і добре відомий у традиційній медицині для лікування захворювань печінки, ангіни, астми, бронхіту та лихоманки. 21 Крім того, було вказано, що Glycyrrhiza glabra Екстракт L. (GG) може зменшити плазмовий TG у моделей щурів із ожирінням. 22

У цьому дослідженні ми безпрецедентно змішали фракцію сапоніну корейського червоного женьшеню (RGS) та екстракт GG та дослідили, чи може суміш у різних пропорціях посилити їх ефект проти ожиріння.

Матеріали і методи

Підготовка зразка

Стандартизовані RGS та GG були придбані у корейської корпорації женьшеню (Теджон, Корея). Стандартизовані екстракти червоного женьшеню фракціонували за допомогою колоночної хроматографії Diaion HP20, використовуючи H2O, 30% етанол (EtOH) і 95% EtOH як елюенти в процесі послідовного елюювання. Потім 95% -ну фракцію EtOH концентрували у вакуумі та сушили розпиленням з отриманням фракції сапоніну. Висушений GG двічі екстрагували 30% EtOH при 80 ° C, фільтрували 1 μм розміру пор, концентрують при зниженому тиску і сушать розпиленням. Потім сухі порошки екстракту RGS та GG змішували при масовому співвідношенні 3: 1 (SG31), 1: 1 (SG11) або 1: 3 (SG13).

Культура клітин та їх диференціація

Преадипоцити 3T3-L1 були придбані в Американській колекції типів культур (CL-173, Манассас, штат Вірджинія, США) і культивовані в модифікованому Дульбекко середовищі Eagle (Biowest, Riverside, MO, USA), що містить 1% пеніциліну/стрептоміцину (P/S; Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) та 10% бичачої телячої сироватки (Gibco) при 37 ° C з 5% CO2. Через 2 дні клітини досягли злиття. Потім клітини індукували диференційованим середовищем MDI, яке містило 10% бичачої сироватки плода (FBS; Gibco), 1% P/S, 0,5 мМ 3-ізобутил-1-метилксантину (IBMX; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, США), 1 μМ дексаметазон (Dex; Sigma-Aldrich) та 10 μг/мл інсуліну (Gibco) протягом 2 днів. Через два дні клітини додатково індукували середовищем диференціювання MDI протягом 2 днів (видаляли IBMX та Dex). Після цього регулярне середовище (10% FBS та 1% P/S) оновлювалось кожні 2 дні до 8-го дня. 23

Аналіз життєздатності клітин

Клітини висівали при щільності 5 × 10 4 клітин/лунку разом з екстрактами (0–300 μг/мл) протягом 24 год. Реагент МТТ додавали до середовища та інкубували протягом 2 годин. Середовище спорожнили, а сіль формазану знову розчинили в диметилсульфоксиді (DMSO; Sigma-Aldrich), вимірявши за допомогою ультрафіолетового (УФ) -видимого спектрометра (Multiskan FC; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). 570 нм. 23

Аналіз фарбування Oil Red O

Клітини висівали при щільності 5 × 10 4 клітин/лунку і спонукали диференціюватись разом з екстрактами (100 μг/мл). Ці зрілі адипоцити промивали сольовим розчином, забуференним фосфатом (Lonza, Walkersville, MD, США), і закріплювали у 4% параформальдегіді при кімнатній температурі протягом 1 години. Промивши захищені клітини 60% ізопропанолом, їх фарбували розчином Oil Red O (Sigma-Aldrich) (0,35% барвником O Oil red у 60% ізопропанолу) протягом 20 хв, а потім промивали дистильованою водою. Пофарбовані клітини сушили природним шляхом, а потім розчиняли у 100% ізопропанолі. Поглинання вимірювали при 520 нм за допомогою УФ-видимого спектрометра. 24

Дизайн експерименту на тваринах

Самців 5-тижневих мишей C57BL/6J отримували від Central Laboratory Animal Incorporated (Сеул, Корея) та акліматизували до лабораторного середовища (температура 24 ° C ± 2 ° C, відносна вологість 55% ± 5% та чергування 12-годинний світлий/12-годинний темний цикл) протягом 1 тижня. Потім цих мишей випадковим чином розділили на дві групи: (1) контрольну групу ( = 8), мишей годували нормальним жиром (NFD; 10% ккал жиру, Дієта з коригованими калоріями, № TD.06416; Envigo, Медісон, Вісконсин, США) та (2) експериментальна група ( = 64), мишей годували дієтою з високим вмістом жиру (HFD; 60% ккал жиру, дієта з коригуванням калорій, № TD.06414; Envigo). Після індукування ожиріння HFD протягом 2 тижнів мишей експериментальної групи знову випадковим чином розділили на сім груп ( = 8 для кожної групи): (1) група HFD, (2) група GC, позитивна контрольна група з ефектом зниження ваги Гарцинії камбоджійської водний екстракт (ГХ, 100 мг/кг/добу), 25 (3) група RGS, (4) група GG, (5) група SG31, (6) група SG11 та (7) група SG13. Всі екстракти (крім ГХ) перорально вводили мишам протягом 10 тижнів (200 мг/кг/день), і мишам надавали вільний доступ до дієти та води. Вага тіла, споживання їжі та споживання води реєструвались щотижня. Інституційний комітет з догляду та використання тварин (IACUC) Університету Халліма затвердив усі експериментальні плани та програми (Номер затвердження: Hallym 2018-61).

Забір зразків крові та органів

Після процесу перорального введення мишей голодували протягом 12 год і знеболювали 2,2,2-трибромметанолом та 2-метил-2-бутанолом (Sigma-Aldrich), а кров збирали з орбітальних вен. 26 Сироватку отримували центрифугуванням (3000 g протягом 15 хв при 4 ° C; центрифуга 5424R; Еппендорф, Гамбург, Німеччина) проби крові і зберігають при -70 ° C. Після забору зразків крові тканини органів видаляли і промивали фізіологічним розчином. Потім вологу видаляли, а висушені тканини органу зважували.