Порівняльний антиліпідемічний ефект введення N-ацетилцистеїну та кунжутного масла при дієті
Анотація
Передумови
Збільшується кількість нових антиліпідемічних методів лікування, що розглядаються. Передбачуваний гіполіпідемічний ефект N-ацетилцистеїну (NAC) та кунжутного масла вивчали на мишачій моделі гіперхолестеринемії, спричиненої дієтою.
Методи
Самці мишей C57bl/6 були віднесені до наступних груп: (NC) контрольна група, (HC) група, яка отримувала тестову дієту з доповненням 2% холестерину та 0,5% холінової кислоти протягом 8 тижнів, (HCN) група, яка отримувала тестову дієту з добавкою NAC (230 мг/кг перорально) та (HCS) групу годували тестовою дієтою, збагаченою 10% кунжутним маслом. Загальний рівень холестерину в сироватці крові, ЛПНЩ-холестерин, ЛПВЩ-холестерин та тригліцериди аналізували на початку та в кінці експерименту. Наприкінці експерименту в сироватці крові вимірювали загальний рівень пероксидів та оксиду азоту (NO). Ураження печінки та аорти оцінювали шляхом фарбування гематоксилін-еозином.
Результати
Вищі рівні загального та холестерину ЛПНЩ у сироватці крові були зареєстровані у всіх групах, які харчувались дієтою з високим рівнем холестерину. Група HCN показала знижений рівень ліпідів порівняно з групами HC і HCS. Ніяких відмінностей між HCS та HC групами не спостерігалось. Вміст перекису в сироватці крові помітно збільшився у мишей, які споживали дієту з високим рівнем холестерину. Введення NAC та кунжутного масла призвело до значного зменшення перекисного окислення ліпідів у сироватці крові на рівнях контрольної групи, тоді як лише NAC відновив біодоступність NO. Що стосується гістології печінки, ураження, що спостерігались у групі HCN, були менш серйозними, ніж ті, що спостерігались в інших групах з високим рівнем холестерину.
Висновок
Одночасне введення NAC, але не кунжутної олії, відновлювало порушений ліпідний профіль та покращувало стеатоз печінки у досліджених мишей з гіперхолестеринемічною дієтою. Обидва агенти покращують антиоксидантний захист сироватки крові.
Передумови
Гіперхолестеринемія у поєднанні з підвищеною концентрацією ЛПНЩ-холестерину є основними факторами ризику розвитку та прогресування атеросклерозу, а отже і серцево-судинних захворювань [1]. На основі цих доказів наукові дослідження спрямовані на відкриття нових препаратів з гіпохолестеринемічним ефектом. Сьогодні для профілактики дисліпідемії пропонуються дієтичні терапії на рослинній основі та натуральні харчові компоненти. Антиоксидант N-ацетилцистеїн (NAC), сірка органо з Цибуля рослини та кунжутна олія з’являються як перспективні гіполіпідемічні засоби в останній літературі.
NAC - це гідрофільна цистеїнвмісна сполука, природно утворена в Цибуля такі рослини, як часник і цибуля. Встановлено, що споживання цієї сполуки ефективно зменшує індукований триацилгліцерином (TAG) високий рівень насичених жирів та накопичення холестерину в печінці мишей. Більше того, було показано, що він захищає печінку від окисного пошкодження, спричиненого високим вмістом жиру [2].
Кунжут належить до виду Sesamum indicum (Педаліеві сім'я). Він широко використовувався як традиційна їжа на сході, але також вважається, що він має важливі лікувальні властивості. Існує безліч даних різних досліджень, в основному щодо видів гризунів, що підтримують гіполіпідемічну дію багатьох компонентів насіння кунжуту та його олії [3, 4]. Satchithanandam та співавт. [4] дійшли висновку, що поглинання лімфатичного холестерину у щурів, яких годували дієтами, що містять кунжутну олію, було приблизно на 50% менше, ніж у щурів, які харчувалися контрольною дієтою. Крім того, введення порошку знежиреного кунжутного насіння у гіперхолестеринемічних щурів-альбіносів покращило їх антиоксидантний статус та суттєво зменшило ліпіди в плазмі [5]. Наскільки нам відомо, на основі літератури немає даних про потенційні гіполіпідемічні ефекти введення кунжутного масла без заміщення інших жирових харчових сполук.
Отже, дане дослідження було проведено для того, щоб визначити, чи матиме введення NAC та кунжутного масла сприятливий гіполіпідемічний та антиоксидантний ефект у мишачої моделі, яка споживає дієту чау, збагачену холестерином та холевою кислотою.
Методи
Тварини
12-тижневих мишей C57bl/6 самців (Mus musculus) були отримані в Інституті Олександра Флемінга (Варі, Греція) і були акліматизовані за тиждень до початку експерименту. Тварин утримували в умовах контрольованої температури (23 ± 2 ° C) та вологості (60%) з 12-годинним циклом світло/темрява. Експериментальний протокол був розглянутий та схвалений Ветеринарним управлінням префектури Афін та Комітетом з етики Медичної школи Національного університету і Афінського університету Каподістрія, відповідно до етичних рекомендацій Директиви Ради Європейських Співтовариств від 24 листопада 1986 р. (86/609/ЄЕС).
Експериментальний дизайн
Всього 25 мишей було розділено на наступні 4 експериментальні групи:
Миші мали вільний доступ до їжі та пиття протягом усього дослідження. Протягом 8-тижневого періоду споживання їжі контролювали щодня, тоді як кількість споживаної води щодня також реєстрували в групі HCN. Мишей зважували раз на тиждень.
Збір крові та вимірювання ліпідів у сироватці крові
Зразки крові мишей відбирали на початку та в кінці експериментального періоду (о 9:00 ранку, після 12-годинного періоду голодування), використовуючи капілярні трубки, введені в медіальне ретроорбітальне венозне сплетення під легкою ефірною анестезією. На початку експерименту від кожної миші відбирали кількість приблизно 150-200 мкл крові. В кінці експерименту та перед евтаназією мишей збирали більшу кількість крові (400 - 500 мкл). Сироватку відокремлювали центрифугуванням при 3000 об/хв протягом 10 хв і зберігали при -80 ° C до аналізу.
Концентрації загального холестерину та тригліцеридів у сироватці крові визначали, використовуючи комерційний набір ферментативних PAP («біоз» - Біотехнологічні програми, Афіни, GR), а холестерин ЛПВЩ визначали ферментативним фотометричним методом холестерину. LDL-холестерин визначали за математичною моделлю "LDL-холестерин = Загальний холестерин- (HDL-холестерин + тригліцериди/5)".
Всі зразки були проаналізовані в лабораторії експериментальної хірургії та досліджень Афінської медичної школи (Афіни, Греція).
Перекисне окислення ліпідів у сироватці крові - Визначення рівнів NO
Загальну концентрацію пероксиду у зібраній сироватці оцінювали фотометрично (набір PerOx, Immundiagnostic AG, Бенсхайм, Німеччина). Загальний вміст оксиду азоту в сироватці крові (NO) розраховували на основі ферментативного перетворення нітрату в нітрит за допомогою нітратредуктази, використовуючи комерційний набір (Загальний набір параметрів аналізу параметрів оксиду азоту та нітратів/нітритів, R&D SYSTEMS, Міннеаполіс, Міннесота, США).
Гістопатологічне фарбування
Наприкінці 8-тижневого періоду тварин піддавали евтаназії під ефірною анестезією з негайним розсіченням печінки та аорти для подальшого гістопатологічного аналізу. Частина печінки та аорти фіксували у 10% формаліні при кімнатній температурі. Потім тканини вкладали у парафін, розрізали та встановлювали на предметні стекла мікроскопа. Зрізи фарбували гематоксилін-еозином і досліджували наосліп двома незалежними дослідниками за допомогою світлової мікроскопії. Точніше, печінку оцінювали, як це було раніше описано Комітетом з патології безалкогольного стеатогепатиту [8]. Гістологічні ознаки були згруповані у 4 широкі категорії: стеатоз, балонізація, портальне запалення та часточна активність. Кожному параметру присвоювали оцінку від 0 (відсутність) до 3 (важке ураження).